尿液及其它體液有形成分檢驗的進展(2)

2. 標準鏡檢定量法 
針對傳統檢查法隨意性大，結果變異大，判斷不標準、結果不統一，無可比性，報告方式可因人而異等問題，中華醫學會臨床檢驗學組提出“尿沉渣檢驗標準化建議”。對材料和器械、標本的收集及運送、尿沉渣檢驗具體操作步驟，應報告的尿沉渣內容檢驗地帶網均明確規定。如收集標本的容器、離心管、尿沉渣計數板、離心機(水平式)相對離心力應在400g左右。而顯微鏡要求有內置光源、光線強度可調、應具備40倍、10倍的物鏡。并對標本的收集、運送、接受均作了明確規定。“建議”中的規定適用于各級醫療單位的推廣應用。 
體液有形成分定量的關鍵設備為專用體液計數池，如Fuchs-Rosenthal細胞計數池，其深度為0.2mm(面積0.625mm2)。市售有一次性的Fast-Read 10或Kova等尿沉渣定量分析板。 
有形成分定量除使用晨尿直接沖入尿沉渣定量分析板外，還可采取定時尿如12h(Addis計數)：留取12h尿液，測定尿液中管型，紅細胞和白細胞等有形成分后，計算總量，用以了解泌尿系統疾病的發展及預后。近年來為方便病人留取尿標本，規定采用晨5∶30~8∶30內的尿標本，這3h晨尿(不加防腐劑)新鮮及時檢查上述有形成分，定時、定速離心、留取定量沉淀物充入計數池后計數，再換算成1h結果，得出1h各有形成分排出數。本法由于時間短，方便病人留標本、對有形成分的影響比12h留尿少，且不受飲食限制以致技術誤差少，干擾因素較少；因此適用于門診或住院病人的連續動態監測，以了解血尿、膿尿治療效果。有人提出離心法不僅費時，且離心后可致尿有形成分可造成損傷、變形，推薦用不離心尿，在倒置顯微鏡檢驗地帶網下觀察尿有形成分。方法為在倒置顯微鏡平臺下，將未離心混懸尿放入光潔度好，有一定深度面積的酶標板內、靜置規定時間后，待有形成分自然下沉至孔底，在倒置顯微鏡下高倍計數10個規定區域中的細胞和管型數。國產倒置顯微鏡、酶標板均易得到，經我們實踐濃縮相當離心50倍、陽性率、精確度、與定量尿分析計數板相關性較好，適合基層單位使用，但應注意有形成分的沉淀受尿比密影響、鹽類結晶可干擾視野觀察。 
3. 尿有形成分染色檢查法 
為了提高檢查尿有形成分檢驗質量，防止病理成分管型漏檢，防止將粘液絲、棉、毛纖維誤認為管型，防止將酵母菌、草酸鈣結晶誤認為紅細胞，防止將上皮細胞誤認為白細胞，確定一些病理成分如細菌或腫瘤細胞，防止因長期目視下疲勞，以及為了長期保存尿中典型成分、為教學、科研制備永久保存標本，可采用染色法后鏡檢。尿有形成分經不同染色液色素對比染色后，形態、結構、清晰而易于識別。選擇染色法有單染色、復合染色、活體染色及特殊染色等，其中巴氏染色針對腫瘤細胞，蘇丹Ⅲ染色脂肪，Hansel染色嗜酸粒細胞，Naphy-ASD染色單核細胞，Gram染色細菌、霉菌，普魯士藍染色含鐵血黃素等。我們在對比傳統的Sternheimer-Malbin(S-M)與Sternheimer(S染色)后，觀察到后者染料殘渣少，在顯微鏡下各種有形成分，特別是管型形態清晰可辨，但染料品牌、染色溫度、pH、滲透量等因素對染色有明顯影響，貯存久未密閉的染色液，濃縮后紅細胞明顯變小，應予注意。 
4. 尿沉渣工作站檢查法 
工作站是將帶攝像頭的顯微鏡定量沉渣計數池與電腦三位一體的聯結，目前品種繁多各具特色。應用一些流程式尿沉渣分析儀可以實現從自動編號，離心、吸取上清液，向尿樣杯中定量滴加染色劑，吹氣混勻，吸取尿沉渣，向玻片定量滴加尿沉渣，鏡檢攝像，統計分析到打印報告一體化式的流式作業；甚至還留有標準接口，可與用戶網絡系統與條型碼儀等聯機，實現數據共享。以后可能還可以用工作站進一步開展檢查腦脊液、漿膜腔積液、羊水、滑膜液、支氣管灌洗液等多種體液的實驗。 
5. 熒光染色流式細胞儀法 
臨床上對確定血尿病人腎性、腎外原因，判斷確定泌尿道感染，了解腎功能改變等越來越重視。現在多數應用的熒光染色流式細胞儀，可以將尿中有形成分用熒光染料染色，各有形成分以單個組列的形式通過流動池的中心(垂直)軸線，每個有形成分經檢驗地帶網氬激光照射后，由于每種顆粒有不同程度的熒光強度(FI)和散射光強度(FSC)，同時各顆粒的電阻大小不同，儀器可將信號轉變成電信號，通過直方圖與散點圖得出各有形成分的數量及形態特征。在儀器使用中要有有效的質量控制措施，還應注意到操作微環境的防塵、保溫、去濕措施以保證儀器的正常使用。而且不同時間、溫度等實驗條件對測定結果也有一定的影響。對“健康”老年人體檢要觀察考慮腎功能低下等方面的特點，而對劇烈運動后的青年，要考慮產生—過性蛋白尿從而導致顆粒管型的暫增多等情況。當實驗結果與臨床資料不符時，必需強調用相差顯微鏡復檢觀察紅細胞形態及管型亞類。 
6. 體外診斷尿影像系統—全智能顯微鏡(AIM) 
自上個世紀80年代起，一些公司推出了顯微鏡尿檢查大型工作站。如今應用的改進尿分析工作站，具有無玻片顯微鏡及獨特的高速數碼軟件，可以在屏幕上清楚地顯示尿中常見12種顆粒成分：如白細胞、白細胞團、紅細胞、鱗狀上皮細胞、非鱗狀上皮細胞、透明管型、未分類管型、結晶、細菌、酵母菌、精子及粘液等，并可根據操作人員需要判斷紅細胞直徑，并可區別尿管型、結晶的亞類。 
四 其它體液有形成分檢查 
1. 腦脊液 
這個與神經系統疾病密切相關的體液自動化檢測越來越受到臨床重視。國內候熙德介紹的改良Sayk旋渦篩濾沉淀法已廣泛應用于收集白血病、腫瘤細胞，其它玻片離心技術(Shandontype 4)、微孔薄膜篩濾法、纖維蛋白網細胞檢驗地帶網捕捉法均可使用，但最簡便的細胞定量仍為采用上述尿液有形成分的Fuchs-Rosenthal法。通過May-Giemsa染色將中性粒細胞、淋巴細胞、單核細胞及組織細胞區別開來為神經系統感染、腫瘤、白血病細胞鑒別提供服務。 
2. 精液 
精液的檢查多采用專用精液檢測的計數板—Makler精子計數板，通過相差顯微鏡下配以顯微照相，可拍攝到精子的運動軌跡，并可從照片上分析精子的運動速度和運動方式。近年來計算機輔助的精液分析(Computer-Aided Semen Analysis，CASA)除了分析精子密度、活動率等指標外，在分析精子運動能力方面也顯示了其獨特優越性。 
3. 排泄物 
如糞便等排泄物的檢查在醫學實驗領域中今后也應予重視。 
五 總結 
體液檢驗特別是尿液分析中有形成分的檢查近10年來已取得較大進展，已出現多種不同自動化儀器代替工作量大的手工儀器，但還只是初篩病理成分，常可出現假陽性，甚至一定的假陰性。用顯微鏡復查復核異常標本仍是確定有形成分的金標準。采用不同的染色方法，用組織化學、免疫化學等新技術新方法建立起檢查體液有形成分的進一步、完善的實驗手段極為重要。