快速了解霉菌形態觀察中一般觀察法的步驟

　　（一）一般觀察法：

　　1.

　　點種培養：

　　用接種針沾取斜面少許孢子在無菌的察氏培養基中央穿刺接種（倒置培養皿穿刺接種），30℃下培養7-10天，形成巨大菌落培養物。

　　2.

　　直接制片：在載玻片中央加一滴乳酸石炭酸棉藍染色液于潔凈，打開霉菌平板培養物，用解剖針從菌落的邊緣挑取少量帶有孢子的菌絲，放入載玻片的染液中，細心地把菌絲挑散開，加蓋玻片，注意不要產生氣泡，置于顯微鏡下觀察，菌絲呈蘭色，顏色的深度隨菌齡的增加而減弱。觀察根霉時，注意觀察其菌絲有無橫隔、假根、孢子囊柄、孢子囊、囊軸、囊托、孢子囊孢子及厚垣孢子。

　　觀察毛霉時，注意觀察其菌絲無橫隔、孢子囊柄、囊軸、孢子囊孢子及后垣孢子。觀察曲霉時，注意觀察其菌絲有橫隔、足細胞、分生孢子梗、頂囊、小梗（形狀、層數及著生情況）、分生孢子。觀察　青霉時，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子梗、帚狀枝（小梗的輪數及對稱性）、分生孢子。觀察紅曲霉時，注意觀察其菌絲有橫隔、分生孢子著生情況、閉囊殼、子囊孢子。

　　（二）載玻片濕室培養觀察法

　　也稱載片培養法，用無菌操作將培養基瓊脂薄層置于載玻片上，接種后蓋上蓋玻片培養，霉菌即在載玻片和蓋玻片之間的有限空間內沿蓋玻片橫向生長。培養一定時間后，將載玻片上的培養物置于顯微鏡下觀察。載片培養法制備的標本片可直接在顯微鏡下觀察，這種培養觀察方法保持了霉菌的自然生長狀態，尤其適用于根霉的假根、匍匐菌絲，曲霉的足細胞的觀察，并且還可在同一標本片上觀察霉菌的不同生長階段的形態。

　　載玻片濕室培養觀察法具體操作：

　　1.

　　準備濕室：在培養皿底部鋪一張圓形濾紙片，濾紙片上依次放上“U”形載玻片擱架、載玻片、蓋玻片（兩片），蓋上皿蓋，外用紙包扎，高壓滅菌（9.8×104Pa）20分鐘后，60℃烘箱干燥，備用。

　　2.

　　取菌接種：用接種環挑取少量待觀察的霉菌孢子，置于濕室的載玻片上，每張載玻片可接同一菌種的孢子兩處。接種時只要將帶菌的接種環在載玻片上輕輕碰幾下即可。（接種量要少，以免培養后菌絲過于稠密而影響觀察）

　　3.

　　加培養基：用無菌細口滴管吸取少許融化并冷卻至45℃的培養基，滴加到載玻片的接種處，培養基應滴得圓而薄，直徑約為0.5cm（滴加量一般以1/2小滴為宜），注意無菌操作。

　　4.

　　加蓋玻片：在培養基未徹底凝固前，用無菌鑷子將皿內的蓋玻片蓋在瓊脂薄層上，用鑷子輕壓蓋玻片，使蓋玻片和載玻片之間的距離相當接近，但不能壓扁。（蓋玻片不能緊貼載玻片，要彼此留有小縫隙，一是為了通氣，二是使各部分結構平行排列，易于觀察。）

　　5.

　　倒保濕劑：每皿倒入約3mL 20%的無菌甘油，使皿內濾紙完全濕潤，以保持皿內濕度，蓋上皿蓋。制成載玻片濕室，28℃培養。觀察：將培養好的載玻片取出，置于顯微鏡下直接觀察。