抗人球蛋白試驗Coomb`s

1． 原理：溫抗體溶血的自身抗體為IgG在AIHA的患者中，此抗體能與表面附有相應抗原的紅細胞結合，使紅細胞致敏而不發生凝集，待加入抗人球蛋白血清（AHGS）后，則與紅細胞上粘附的IgG相結合，使紅細胞串并在一起而發生凝集，此即為直接抗人球蛋白試驗（ＤＡＴ）。患者血清中存在游離的自身抗體，則可用Rno(D)陽性的Ｏ型紅細胞加以吸附，再用已吸附有自身抗體的紅細胞與AHGS作用而發生凝集反應，此即為間接抗人球蛋白試驗（ＩＡＴ）。
2． 試劑：抗人球蛋白（IgG;IgM;IgA;C3,IgG1;IgG2;IgG3;IgG4美國產）。
3． 操作：
3．1 在80×60mm平板玻片，用油漆均分成12個小格。
3．2 將各種抗人球和C3分別作倍比稀釋（2；4；8-----）后；依次吸取10ul于格內，做好標記。
3．3 每孔加入洗滌后5％被檢RBC懸液10ul。
3．4 混勻放密閉保濕盒內，37度保溫30分鐘；（每隔10秒混勻一次）于鏡下作效價和分值測定。
4. 結果：
 （＋－）：2分  反應液中有3－5個小凝塊（4個RBC以上緊密聚集）。
 （＋） ：4分  反應液中有6－10個小凝塊游離RBC約3／4。
 （＋＋）：6分  反應液中有11－30個中等大小凝塊游離RBC約1／2。
 （＋＋＋）：8分反應液中有充滿凝塊游離RBC約1／4。
 （＋＋＋＋）：10分  反應液RBC呈結實而大的凝塊游離RBC極少。
5. 正常參考值：陰性。
   ６. 注意事項：    
    ６．１患者血標本必須新鮮，血球洗滌要干凈不帶有血漿蛋白，一般生理鹽水理為血清量的４０００倍以上。
    ６．２每次試驗應作陰陽對照。
    ６．３對研究溫抗體型AIHA而言，應選擇單抗特異類（抗IgG、IgC、3d、C3c等）的ＡＨＧＳ，不僅診斷所需，且可將溫型抗體ＡＩＨＡ進一步分型。
    ６．４血液用ＥＤＴＡ抗凝為佳且應立即試驗，以防標本放置過程中有非特異性的補體結合，致出現假陽性。
２． 臨床意義：   
    ７．１溫抗體型導致的AIHA,DAT,強陽性，IAT多為陰性，但亦可陽性。
    ７．２藥物誘發的ＩHA，根據類型不同：多巴類ＤＡＴ與ＩＡＴ均為陽性；青霉素類ＤＡＴ陽性，ＩＡＴ陰性；奎寧類因其抗體多為IgM型，ＤＡＴ多為陰性；如改用抗人全血球蛋白則ＤＡＴ可為陽性。    
    ７．３冷凝集素綜合征：用抗人全血清的抗人球與３７度洗滌過的患者紅細胞用試驗，ＤＡＴ亦可陽性，如用單抗IgG或IgM的特異抗血清用試驗，ＤＡＴ則為陰性。３７度作ＩＡＴ結果陰性，溫度下降則ＩＡＴ陽性。
    ７．４ＰＮＨ：患者在溶血發作時，ＤＡＴ強陽性，發作后轉陰性；ＩＡＴ常為陰性。
    ７．５新生兒同種免溶貧：本病是孕婦的血型抗體通過胎盤進入胎作的血液，對胎兒紅細胞的抗原起破壞作用而致的溶血病。故母親與胎兒的Rh血型、ＡＢＯ型或其它血型不合時均可發生。因Rh抗體引起溶血的病例，全抗或單抗IgG或IgM呈陽性，且持續數周，經換血與輸后陰性轉。因ＡＢＯ血型不合引起溶血的病例，ＤＡＴ多為陰性或弱陽性。