支原體分型試驗

1、材料
Dienes染色液，1.5%毛地黃皂苷液。
2、方法
（1）Dienes菌落染色：Dienes染色液是將2.5g亞甲藍、1.5g天青II、10g麥芽糖、0.5g碳酸鈉溶于100ml蒸餾水中。染色時直接吸入染色液覆蓋菌落上1min左右，用生理鹽水洗去染色液后，在低倍顯微鏡下可見支原體菌落成藍色，其他細菌菌落不著色，容易鑒別。
（2）毛地黃皂苷敏感性試驗：用95%酒精配制1.5%毛地黃皂苷液，56℃水浴加熱使完全溶解。然后將此溶液浸濕滅菌的小圓濾紙。37℃使干燥，置冰箱保存使用。將待檢支原體菌液涂種于固體培養基上，再將上述毛地黃皂苷紙片放于接種培養基上，培養3—5d后，低倍鏡下觀察菌落生長情況。若有抑制帶出現，帶寬>2mm的為支原體，帶寬<2mm為無甾醇原體。
（3）生化反應試驗：常利用發酵葡萄糖、水解精氨酸、水解尿素等生化反應鑒別支原體。
表 人類支原體的生化反應
支原體 是否需要 分解 水解 水解 還原 吸附
膽固醇 葡萄糖 精氨酸 尿索 四氮唑 血細胞
發酵支原體 + + + — — —
肺炎支原體 + + — — — —
溶脲脲原體 + — — + — +
人型支原體 + — + — — —
生殖支原體 + + — — — +
唾液支原體 + — + — — —
口腔支原體 + + + — — —
穿通支原體 + + + — — +
（4）血細胞吸附試驗：在平板瓊脂培養基上生長的支原體菌落滴上豚鼠紅細胞懸液，人體的某些支原體有吸附作用。
（5）生長抑制試驗：用直徑6—8mm的圓形滅菌濾紙片，用未經稀釋的抗血清濕透后，放入無菌平板內，于4℃下干燥待用。吸取待檢菌株的菌液0.5ml涂布于固體培養基上，放置37℃使瓊脂表面稍干燥 。無菌操作夾取抗血清紙片貼于瓊脂表面，37℃培養4—5d。在低倍鏡下觀察，當濾紙片周圍無菌落生長，出現抑菌圈大于2mm者表示該菌與抗血清的免疫原同一菌種，小于2mm為異種。試驗時應該設立陰性對照組和陽性對照組