氨基酸分析方法及儀器比較

一、氨基酸分析方法分類

氨基酸分析按其分離和檢測方法的不同可分為三大類型。第一類是基于陽離子交換柱分離、柱后茚三酮衍生、光度法測定的離子交換色譜法（IEC）。此類方法由Stein和Moore兩人1958年發明，并于1972年獲諾貝爾獎，是當今國際標準和國家標準以及仲裁和涉外的方法。

第二類是所有基于反相色譜分離、柱前衍生、熒光或紫外檢測的高效液相法（HPLC）。

第三類是陰離子交換分離直接安培法檢測的離子色譜法IC，嚴格說來，陰離子交換和陽離子交換都叫“IEC”，在此將陰離子交換分離、安培檢測的方法歸類為IC，是因為這類儀器實際上就是離子色譜儀，只不過配置側重點為氨基酸分析。本文中對三類方法多用簡稱。

說明：

1、PITC異硫氰酸苯酯；OPA鄰苯二甲醛；FMOC 9-芴基甲氧羰酰氯；AQC 6-氨基-喹啉基-N-羥基琥貝酰亞胺-氨基甲酸酯；DABS-Cl 二甲基氨基偶氮苯磺酰氯。

2、IEC法也可使用柱后OPA衍生（熒光檢測），可以降低檢測限到1pmol，但無法檢測二級氨基酸。

二、用戶如何選擇適合自己的方法和儀器

氨基酸分析的方法和儀器多種多樣，用戶應該根據自己的實際應用情況和發展趨勢來選擇方法和儀器。選擇時可參考以下幾個方面：

1、是否需要對分析結果負責（如對外出具報告等）

IEC儀器使用茚三酮柱后衍生法，符合國家標準和國際仲裁標準，而IC法和HPLC法雖然總體性能也比較穩定可靠，但其測量結果與茚三酮法有較大差異，且結果難以長期重復，這對于仲裁不利。

目前，IC法和HPLC法分析氨基酸一般僅用于不太深入的研究，而且主要是利用其靈敏度較高的特性。也有部分企業用來做內部質量控制（國家沒有制定相關標準），但如果要考慮對外做樣并出具結果報告，IEC儀器是唯一選擇。由于國內的氨基酸分析呈現急劇上升的勢頭，而很多單位經濟能力有限，因此也確有不少單位購買專用氨基酸分析儀作為創收手段。

2、一次進樣需要出峰的數量是多還是少

氨基酸種類繁多、性質接近，因此氨基酸分析是色譜界公認的難題，盡管現在有多種多樣的方法，但沒有任何方法能夠保證所有氨基酸峰能夠一次進樣完全的分離。僅僅從分離程度來說，好的HPLC方法最多可以一次分離檢測20種左右的氨基酸峰，IC法最多可一次分離檢測約30種氨基酸峰（理論上說來，IC法可達到與IEC法相當的出峰數量，但金電極的基線漂移較大，保留時間太長的峰就難以定量分析），IEC法最多一次可分離檢測50種左右的氨基酸峰。

從這個角度來說，如果您需要分析游離氨基酸樣品，就應當選擇IEC儀器。

3、氨基酸分析頻率高還是低

氨基酸樣品分析頻率如果達到每個星期至少1次，就可以算“頻率較高”，少于每周1次就可以說是“較低”。頻率較高時，應當儀器專用化（即便是用HPLC和IC法，也應專用于氨基酸分析），因為反復更換柱子和緩沖體系不僅麻煩、平衡時間長，難以保證分析結果的可靠性和重復性，而且容易損壞儀器。

4、氨基酸樣品總量是多還是少

總體的成本應考慮到做樣成本，而不能只看儀器本身。HPLC做氨基酸分析時，每根柱子只能進樣100～500針，而IEC儀器的柱子都超過1000針（sykam柱子使用國產試劑時大于4000針，使用進口試劑時大于6000針）。