紙層析法(paper chromatography)是生物化學上分離、鑒定氨基酸混合物的常用技術,可用于蛋白質的氨基酸成分的定性鑒定和定量測定。
紙層析法又稱紙色譜法,是用濾紙為支持物,所用展層溶劑大多由水和有機溶劑組成,濾紙纖維與水的親和力強,與有機溶劑的親和力弱,因此在展層時,紙纖維上吸附的水分是固定相,有機溶劑是流動相。溶劑由下向上移動的,稱上行法;由上向下移動的,稱下行法。將樣品點在濾紙上(此點稱為原點),進行展層,樣品中的各種氨基酸在兩相溶劑中不斷進行分配。
由于它們的分配系數不同,不同氨基酸隨流動相移動的速率就不同,于是就將這些氨基酸分離開來,形成距原點距離不等的層析點。
引申:
精密稱取酪氨酸、色氨酸、苯內氨酸各適量,分別用水制成1ml含20μg(色氨酸)、40μg(酪氨酸)、200μg(苯丙氨酸),在波長230~300nm測定各氨基酸的吸收光譜。 在20種天然氨基酸中,只有酪氨酸、色氨酸和苯內氨酸,在紫外區最大吸收,酪氨酸的最大吸收峰的波長275nm處,色氨酸的最大吸收峰在波長280nm處,同時在波長288nm處有一個肩峰,苯丙氨酸最大的吸收峰在波長258nm處,同時在257nm和264nm處有兩個較小的吸收峰。由此可見,這三種氨基酸可以通過紫外吸收光譜加以鑒別。
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