氨基酸測定問題

問：請教我現在測定氨基酸（只是打算測定其中的天門冬氨酸和谷氨酸以及丙氨酸三種氨基酸）：現用島津液相，LC-10AT的泵和SPD-10A的檢測器，色譜柱ods C18柱(250 X 4．6mm)，檢測波長254nm，柱溫40cc，流速lmL·min～，流動相A：0．1mol·L- ，醋酸鈉溶液(pH6．5)一乙腈(93：7)，流動相B：乙腈一水(8o：20)，并按下述進行梯度洗脫。線性梯度洗脫程序：0．0 min，0％B；13 min，7％ B；23 min。

23％ B；29 min，35％ B；35 min，40％B；40 min，100％B；45 min，100％B；47 min，0％B。

空白梯度基線飄移，而且在20多分鐘有較大的很寬的峰，每次梯度都是相同的時間和電壓如何？我已梯度洗了一夜也是如此啊，請問我這個方法可以測定氨基酸嗎？

答：AccQ衍生方法，我做過類似的，供參考：

色譜條件與系統適應性試驗 用十八烷基硅烷鍵合硅膠為填充劑；以0.14mol/L醋酸鹽緩沖液（取三水合乙酸鈉19.04g，加1000ml水溶解后，加2ml三乙胺，混勻，用磷酸調節pH值至4.95，濾過，即得）-乙腈（90：10）為流動相；檢測波長為248nm；柱溫37℃。

衍生劑配制 取1.0ml AccQ Flour TM 2B至AccQ Flour TM 2A瓶中，50℃加熱5～10min使溶解，即得衍生劑。

衍生量取10μl供試品溶液、對照品溶液分別置于衍生小管中，加AccQ Flour TM Borate buffer（硼酸緩沖液）70ul，渦旋攪拌，在不斷攪拌下加衍生劑20ul，密閉，在55℃下加熱5min或室溫靜置45min。

測定法 取本品，精密稱取適量，加水溶解并稀釋制成每1ml中約含100ug的溶液，精密量取10μl注入液相色譜儀，記錄色譜圖。另取甘氨酸對照品適量，精密稱定，同法測定。按外標法以峰面積計算，即得。

注：AccQ Flour TM 2A試劑； AccQ Flour TM 2B試劑； AccQ Flour TM Borate Buffer試劑均由waters公司提供。

答：如果我沒有記錯的話，你所要測定的三種氨基酸好像在紫外及可見光波長下都沒有較明顯的特征吸收峰，應該考慮一下采用柱前或柱后衍生HPLC法測定。