細胞系的DNASTR譜_利用ABI377DNA測序儀進行凝膠電泳

TEMEDSGM Plus?凝膠上樣混合液

ABI377 DNA 測序儀制膠材料凝膠裝置材料冰或者電制冷板熱循環儀凝膠板和凝膠盒緩沖液梢熱傳導板

1. 在燒杯中混合以下各成分，制備 4 % 聚丙烯酰胺凝膠（制膠材料：量筒、天平、過濾器（如 Sartolab 150 ml 濾器），真空泵、梳子、0.2 mm 膠隔板、磁力攪拌器、尿素（如 Fisher）、丙烯酰胺貯存液（如Bio-Rad 40 % 丙烯酰胺/BIS 19：1）、無菌純水（如 Fisher AR 級水）、混合床基樹脂（如 Sigma）、過硫酸銨（如 Sigma）、10× TBE （如 National Diagnostics）、TEMED （如 Sigma））：

(a)尿素 18 g；

(b)40 % 丙烯酰胺貯存液 5.2 ml；

(c)水 27 ml；

(d)混合床基樹脂 0.5 g 。

2. 灌膠。

3. 參照技術手冊，安裝 ABI377 DNA 測序儀，準備跑膠。

4. 從熱循環儀中取出樣品，制備上樣混合物（甲醛、葡聚糖藍色染料（試劑盒提供）、Gene Scan500（GS500 ROX）內尺寸標準（試劑盒提供）），每管如下：

(a)甲醛 1.2 μl；

(b)GS500 ROX 0.13 μl；

(c)葡聚糖藍色上樣緩沖液 0.2 μl。

5. 吸 1.5 μl 上樣混合物，加入適當的管或板中。同時制備 2 個等位梯度（試劑盒提供）的上樣混合物。向適當的管或板中加入 PCR 擴增產物或等位梯度，輕輕混合。

6. 加熱含 PCR 擴增產物的上樣混合物，使 DNA 變性，95°C 約 3 min，立即移入冰浴中或設定在 0°C 的電子冰盒中。

7. 參照 ABI 技術手冊，完成 DNA 測序儀的安裝，裝上凝膠，從單數泳道開始上樣。

8. 跑膠需 2.5 h 。