腫瘤動物模型的構建——淋巴瘤篇

淋巴瘤（Lymphoma）是一種原發于淋巴結和淋巴組織的惡性腫瘤。近年來其發病率正以每年4%的速度上升。初期往往僅因表現為持續發燒或淋巴結腫大，而被大家忽視。加上淋巴瘤亞型（＞80種）眾多，治療困難重重。因此迫切需要建立正確的動物模型，這對于研究淋巴瘤的發病機制和治療手段十分重要。

淋巴瘤為全身性腫瘤？

淋巴系統像血液系統一樣遍布全身，所以淋巴瘤幾乎可以發生在身體的任何部位。如果淋巴瘤細胞浸潤進血液，則發展成淋巴細胞白血病(lymphoma cell leukemia，LCL)，變成液體瘤，成為全身性腫瘤。

如下圖：人體淋巴組織分布和淋巴瘤后期轉移示意圖（圖片來自Zevalin網站）。

淋巴瘤分類眾多

淋巴瘤種類繁多，發病機制復雜，分為霍奇金淋巴瘤（Hodgkin lymphoma，HL）和非霍奇金淋巴瘤（non-Hodgkin lymphoma，NHL）兩類，其中以生發中心（Germinal center）來源的淋巴瘤占到NHL的80%，包括伯基特淋巴瘤，濾泡性淋巴瘤和彌漫大B淋巴瘤。其發病機制是B細胞經歷生發中心不同階段時，基因發生突變易位等。

生發中心來源淋巴瘤發病機制示意圖[1]

臨床上根據淋巴瘤分類分為多種細胞株，下面列舉一些常用淋巴瘤細胞株：

下面說說常見的淋巴瘤動物模型有哪些

一、異種移植型淋巴瘤模型

淋巴瘤細胞株或病人淋巴瘤組織種植于免疫缺陷動物體內，建立移植性淋巴瘤模型，是目前研究最多的腫瘤模型。

一般選擇免疫缺陷小鼠：SCID小鼠或NOD/SCID小鼠

淋巴瘤動物模型常選用SCID小鼠，它是一種先天性T/B淋巴細胞聯合免疫缺陷動物，移植成功率比較高。但SCID小鼠仍殘留某些免疫功能，而NOD/SCID小鼠較SCID小鼠出現更多的免疫缺陷，它又降低了NK細胞的活性，成為淋巴瘤實驗研究的有效工具。

異種移植進一步又分為細胞移植（CDTX）和組織塊移植（PDTX）

操作步驟如下圖所示[2]：A（CDTX）和B（PDTX）

注意：

（1）細胞移植法：常用皮下荷瘤，也用腹腔注射，靜脈注射和原位荷瘤。荷瘤細胞數目一般在10⁷~10⁸，數目過少很難成功。根據淋巴瘤類型選擇合適的細胞株，根據實驗目的選擇不用的荷瘤位置。

（2）組織塊移植法：來源于腫瘤手術的標本移植于小鼠體內，必須要求組織塊新鮮、無壞死、無包膜，移植時切成1-3mm³小塊置于生理鹽水或磷酸鹽緩沖液內備用，必須無菌操作。

二、基因工程型淋巴瘤模型

淋巴瘤種類繁多，不同基因突變導致產生不同淋巴瘤，因此基因修飾的淋巴瘤模型，對于研究不同類型的淋巴瘤發病機制及藥物研發非常重要。

如Eμ-MYC轉基因小鼠模型，是將MYC基因插入到IgH位點，模擬人體內染色體易位所致c-myc的表達模式，數月內B細胞淋巴瘤發生概率100%（下表1）。下表為不同類型的淋巴瘤的轉基因小鼠模型[2]

三、誘發型淋巴瘤模型

運用物理、化學和生物等方法與動物特定部位直接或間接接觸，使靶器官產生腫瘤。其操作相對簡便，常用誘導劑成瘤機制清楚，成瘤率較高，是一種較好的建立腫瘤模型的方法。

如C57BL/6J小鼠全身輻射γ射線，每周一次，持續四周則有90%的小鼠被誘發為胸腺T細胞淋巴瘤[3]。

綜上所述，隨著對淋巴瘤研究的不斷深入，淋巴瘤造模領域取得了諸多進展。為了更加準確全面認識淋巴瘤的發病機理及治療方式，選擇正確的動物模型，至關重要。

參考文獻

[1] Basso, K. & Dalla-Favera, R. Germinal centres and B cell lymphomagenesis. Nature reviews. Immunology 15, 172-184 (2015).

[2] Kohnken, R., Porcu, P. & Mishra, A. Overview of the Use of Murine Models in Leukemia and Lymphoma Research. Frontiers in oncology 7, 22 (2017). 

[3] Herranz, M., et al. The novel DNA methylation inhibitor zebularine is effective against the development of murine T-cell lymphoma. Blood 107, 1174-1177 (2006).