維生素D在魚肝油和雞蛋黃等食品中含量較多，一般成人不會缺VD，而嬰兒容易缺乏。
1、操作步驟
⑴ 提取
樣品（奶粉）＋水→混勻 在NH4OH的作用下酪蛋白Ca鹽溶解加入乙醇使脂肪球分離→乙醚、石油醚萃取得到脂質（其它樣品可用索氏提取得到脂質）
⑵ 皂化
在奶粉中脂溶性物質有VD、β-胡蘿卜素、VA、VE、甾醇、脂肪。
目前皂化有三種情況：
低溫（室溫） | 中溫（70℃±2℃） | 高溫（100℃15min） |
低堿 | 低堿 | 低堿 |
回收率不完全 | 回收率46% | 回收率70% |
低堿 = 脂肪︰KOH為1︰2.5的關系
另外在皂化時加抗氧化劑與不加抗氧化劑回收率不一樣，加抗氧化劑的回收率高于不加抗氧化劑的回收率。
有人將上面的皂化條件互補，采用中溫-高堿并加抗氧化劑，這樣的回收率為96.8%，效果較好。
故皂化條件 ：70℃±2℃高堿 + 抗氧化劑
⑶ 萃取
⑷ 除甾醇
甾醇在食品中含量較多，主要是通過柱子，這個柱子就是毛地黃皂甙。
甾醇 + 毛地黃皂甙 → 沉淀
洗脫液用乙醚︰己烷 = 1︰5配制而成
甾醇︰毛地黃皂甙 = 1︰14 用量
⑸ 皂土柱層析
當VD與VA共存時，須用皂土柱層析除VA及VA的分解產物。
測定方法有兩種：
比色法：
維生素A／CHCl3 ＋ SbCl3／CHCl3／乙酰氮 → 形成橙黃色物質 → 500 nm下測定
紫外分光光度法
VD／乙醇 → 265 nm下測定
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