藻酸鹽包裹小鼠腫瘤細胞實驗

實驗概要

本實驗介紹了藻酸鹽包裹小鼠腫瘤細胞實驗操作流程。

主要試劑

藻酸鈉，CaCl₂，FITC標記的葡聚糖(FITC-Dextran)

主要設備

移液器，磁力攪拌器，超凈臺，解剖臺，注射器，熒光酶標儀，離心機

實驗材料

小鼠腫瘤細胞，免疫小鼠

實驗步驟

1. 將藻酸鈉溶于無菌生理鹽水，終濃度為 1.5%；

2. 收集培養的腫瘤細胞，用無血清的培養基洗滌1 次，將細胞沉淀重懸于1.5%藻酸鈉溶液中；

3. 將上述腫瘤細胞懸浮液用 1 ml 加樣槍緩慢滴入磁力攪拌的 250 mMCaCl₂溶液中，形成乳白色的藻酸鹽小珠。繼續靜置于 250 mMCaCl₂ 中 30 min 即可使用。以上操作步驟均在無菌條件下進行；

4. 將第 4 次免疫后 7 天的小鼠用苯巴比妥鈉 0.1ml( 按 100 mg/kg 計) 腹腔注射麻醉，小鼠麻醉后置于解剖臺上，切開背部皮膚，皮下植入 4 粒藻酸鹽包裹顆粒，縫合皮膚，外敷手術膠膜；5天以后，小鼠經尾靜脈注入100 μl (按 100 mg/kg計) FITC標記的葡聚糖(FITC-Dextran)；

5. 20 min 后處死動物，取出藻酸鹽顆粒，常溫下加入1 ml 的生理鹽水，剪碎研磨顆粒，再加入1ml的生理鹽水，混勻標本，放置1 小時， 1500 rpm離心 5 min。取上清液用熒光酶標儀測定；

6. 用不同濃度的 FITC-Dextran 制備標準曲線。