過氧化物酶染色（Washburn法）

1. 實驗原理

粒細胞和部分單核細胞的溶酶體顆粒中含有過氧化物酶，pox能分解H2O2釋放出新生氧，使四甲基聯苯胺氧化成聯苯胺藍，后者與亞硝基鐵氰化鈉結合，再進一步氧化形成穩定的藍色物質，沉淀于酶活性的細胞質內。

2. 標本采集

2.1 病人準備：了解病人是否對局麻藥有過敏史。凝血因子嚴重缺陷引起的出血性疾病，穿刺部位有炎癥或有畸形，晚期妊娠婦女作骨髓穿刺時要慎重。

2.2 標本種類：新鮮抽取的骨髓穿刺液

2.3 標本采集要求

2.3.1 高壓消毒的穿刺針，一次性無菌手套和抽取骨髓液的無菌注射器。

2.3.2 臨床上首選穿刺部位為髂后上棘；翻身困難，需多部位穿刺患者可選擇髂前上棘為穿刺部分。小于3歲的小兒還可選擇脛骨頭內側為穿刺部位。

3. 標本儲存：室溫避光處保存，若不能及時測定，可采用95％乙醇固定2分鐘，可保存數天。

4. 標本運輸：室溫運輸

5. 標本拒收的標準：溶血、稀釋標本不能作測定。

6. 試劑

6.1 試劑名稱：血細胞pox染色試劑

6.2 試劑生產廠家：上海太陽生物技術公司

6.3 試劑組成

試劑1：poxⅠ液（紫紅色）2℃-8℃避光保存，有效期六個月。

試劑2：poxⅡ液（無色）2℃-8℃避光保存，有效期六個月。

試劑3：95％乙醇，室溫避光保存。

試劑4：瑞氏染液，室溫避光保存。

7. 操作步驟

7.1 新鮮涂片滴加Ⅰ液數滴（覆蓋血膜為宜），室溫放置1分鐘，勿沖洗即滴加Ⅱ液數滴，混合后室溫放置5分鐘，流水沖洗。

7.2 滴加95％乙醇脫色，水洗后瑞氏染色，復染后鏡檢觀察結果。

8. 結果判斷

8.1 陽性—細胞內出現棕黃或藍黑色顆粒沉淀物質，定位于胞質。

8.2 陰性—細胞內無棕黃色或藍黑色顆粒。

9. 臨床意義

9.1 粒細胞系統呈集中狀粗顆粒強陽性反應，單核細胞系統呈彌散狀顆粒弱陽性反應，部分原始單核細胞可呈陰性反應。網狀細胞及吞噬細胞有不同程度的陽性。

9.2 淋

巴細胞系、紅細胞系、巨核細胞系、漿細胞系等均為陰性反應。

10. 操作性能：快速簡便，特異性強，靈敏度高。

11. 方法局限性

11.1 標本應新鮮，且未受其他化學物的污染。若標本采集后不能及時測定，可采用95％乙醇固定2分鐘后，可保存數天。

11.2 雙氧水（Ⅱ液）最適濃度為0.05mol/L左右，濃度過高，將會抑制酶的活性。