酶聯法檢測人類免疫缺陷病毒HIV

實驗概要

本實驗用ELISA法檢測了人類免疫缺陷病毒HIV。

實驗原理

在微孔板上預包被高純度基因重組HIV(1型加Ⅱ型)，與樣品中抗HIV抗體反應，同時加入HRP標記HIV(1型加Ⅱ型)抗原。然后用TMB底物作用顯色。通過酶標儀檢測吸光度(OD值)從而判定樣品中HIV抗體的存在與否。

主要試劑

1．預包被微孔反應板條

2．酶標試劑

3．陰性對照

4．陽性對照

5．洗滌液

6．顯色劑A、B

主要設備

酶標儀或全自動酶聯免疫檢測儀。

實驗材料

靜脈抽血2ml，不抗凝

實驗步驟

1．將樣品對應微孔按序編號，每板應設陰性對照3孔，陽性對照2孔，空白1孔。

2．每孔加人酶標試劑100ul，空白孔除外。

3．分別在相應孔中加入待測樣品或陰性對照、陽性對照20ul，振蕩混勻。37℃環境中溫育60min。

4．棄去孔內液體，用洗滌液充分洗滌6遍，最后一次盡量拍干。

5．每孔加人顯色劑A、B液各50u1，輕輕振蕩混勻，置37℃環境中避光顯色10min。

6．每孔加終止液50ul，輕輕振蕩混勻，設定酶標儀波長450nm(建議用雙波長檢測)測定各孔吸光度。

7．結果判定樣品OD值≥臨界值(cut off)者為HIV抗體初篩陽性(注意：初篩陽性標本應重新取樣品進行雙孔復試，復試陽性者應按“全國HIV檢測管理規范”送HIV確認實驗室進行確認試驗)。樣品OD值<臨界值(cutoff)者為HIV抗體陰性。

注意事項

1．檢測單位必須是經當地衛生行政部門批準的HIV初篩實驗室。

2．檢測必須符合HIV實驗室管理規范和生物安全守則的規定，嚴格防止交叉污染。操作時必須戴手套、穿工作服，嚴格健全地執行消毒隔離制度。所有樣品、洗滌液和各種廢棄物都應按傳染物處理，終止液為2mol／L硫酸，使用時必須注意安全。

3．試劑盒從冷藏環境中取出同時應置室溫環境中平衡30min后方可使用，未用完的微孔條密封保存。

4．加液時必須用加液器，并經常校對加液器的準確性。

5．洗滌時各孔均需加滿洗滌液，防止孔內有游離酶不能洗凈。使用洗板機洗滌應設定30～60s浸泡時間。

6．HIV抗體檢測結果的判定必須以酶標儀讀數為準，建議用雙波長450／630nm檢測。

7．操作應按說明書嚴格進行，不同批次試劑不得混用。

[臨床意義] ELISA法HIVI型加Ⅱ型抗體陽性提示可能為HIV感染，但須經有關權威部門確認并須結合流行病學史和現病史診斷，同時送有國家認可資格的確認實驗室進行確認。