BHA、BHT、PG混合使用時的測定方法

目前國內的一些食品廠，近年來，有的將三種或其中的兩種，分別用

于高油脂的食品中如餅干、巧克力、奶糖、花生米、核桃仁罐頭

等BHA、BHT、PG混合使用時BHA與 BHT的總量不得超過0.1g/kg，

即100mg/kg, 而 PG不得超過50mg/kg。本法是用石油醚將食品中的三種抗氧化劑萃取出來，然后從萃取液中萃取PG，再經硅膠柱層析將BHA,BHT分離。             

1.原理：抗氧化劑與福林---酚試劑結合，生成一種蘭色絡合物，所生成的顏色深淺與抗氧化劑的濃度成正比，可比色定量。

2.試劑：a.石油醚30-60℃;b.10%碳酸鈉; c.無水乙醇; d. 硅膠，柱層析用，60目; e.福林---酚試劑：稱鉬酸鈉25g→加入85%磷酸50ml，濃鹽酸100ml，水700ml，回流加熱10小時，然后加入硫酸鋰150g，水50ml，溴數滴，煮沸15分鐘，最后加水稀釋到1000ml,使用時用水稀釋三倍; f.抗氧化劑標液：稱PG、BHA、BHT各100微克，用80%乙醇溶液溶解后定容100ml(棕色瓶)→冰箱中保存即1000微克/毫升。

3.操作方法

1) BHT的提純方法：取一層層析柱，按規定裝填好，先用石油醚潤濕，將上面提純的PG后分液漏斗內剩余的石油醚層（BHT與BHA的混合液，）全部注入層析柱，用石油醚淋洗，收集150ml淋洗掖作為BHT檢查液;

2) BHT的提純方法：根據層析柱內淋洗液基本流盡，再用無水乙醇淋洗，收集100ml淋洗液，供BHA檢驗液。

3）顯色：吸取PG檢驗液5ml于10 ml比色管中，取BHT與BHA各5 ml分別于蒸發皿中，在暗室中自然風干，然后在PG、BHA、BHT被檢液中各加入10%碳酸鈉0.5ml混勻后，各加入0.5ml福林---酚試劑，用水稀釋到總體積6 ml放2小時后顯色，在730nm下測定E.。4)標準曲線的繪制

準確吸取不同濃度的抗氧化劑標液于10ml比色管中。

10ml比色管         1       2        3        4      5       6

標液10μg/ml     0.0     1.0     2.0     3.0    4.0    5.0

10%碳酸鈉       ———→0.5ml←——————

水                 ———→4ml←——————

福林---酚試劑        ———→0.5ml←——————

加水               ———→至總體積6ml←——————

放兩小時比色（730nm測定PG、BHA、BHT的E）,繪制標準曲線。

4.計算：根據測的樣品的溶液的光密度，從標準曲線上分別查出對應的PG、BHA、BHT含量（微克/毫升）。

抗氧化劑（mg/Kg）= V/W*V₂/V₁*C/V₃*1000/1000

C-----從標準曲線上查得的PG,BHA,BHT的濃度（微克/毫升）

V-----樣品定容得體積（ml）

V₁ ---PG、BHA、BHT分離時的體積（ml）

V₂---PG、BHA或BHT分離后的每種的定容體積（ml）

V₃----顯色時取樣液得體積 （ml）

W-----樣品重量（g）

1000---將μg換算成 mg

1000----表示單位（將g換成Kg）

5.注意事項：

⑴抗氧化劑BHT穩定性較差、易受陽光、熱的影響，操作時應避光。

⑵抗氧化劑本身會被氧化，應盡快分析，避免誤差。

⑶層析柱的大小，吸附顆粒的范圍，吸附劑的多少，裝填的高度都對分離有影響，必須嚴格控制條件。