DNA的提取實驗

實驗方法原理 酚為有效的蛋白質變性劑，并且飽和的酚與水相有效的分開．因此，在含核酸的樣品加入酚，可將樣品中的蛋白質變性后形成沉淀層，位于水相與有機相的界畫，從而達到純化核酸的目的．但酚不能完全抑制RNA酶的活性，而且酚層中含有10－15%的水,從而溶解一部分poly－（A）RNA。將酚與氯仿聯合使用即可克服這兩方面的不足．氯仿除可使蛋白質變性外，還能加速水相與有機相的分層．在氯仿中加入少許異戊醇可減少油提生產生的泡沫．在酚－氯仿聯合抽提核酸后，再加氯仿抽提一次；可除去樣品中的痕量酚．

試劑、試劑盒 熏蒸酚氧仿異戊醇氯仿異戊醇混合液

實驗步驟

實驗試劑：

l. 飽和的熏蒸酚：市售AR經酚須在182度用空氣冷凝管進行重蒸餾，冷卻后加入8一羥基喹啉，使其濃度達到1g／L，向液體酚中加入等體0.5mlTris－HCL緩沖液（PH8.0），置磁力攪拌15min，抽取上層（水層）液體再加入等體積0.lmol／LTris－HCL緩沖液（pH8.0），同樣攪拌15min，分相完全后吸取上層液體，最后向酚層（下層）加入1／10體積的含2g/L巰基二醇的0.1mol/LTris－HCL緩沖進（pH8.0），分裝后避光20度保存，至少可用一個月，

2. 氧仿

3. 異戊醇

4. 氯仿／異戊醇混合液，比例為24：1或9：1

①8一羥基喹啉為黃色化合物，是一種抗氧化劑．又是酶的部分抑制劑和金屬離子的弱結合劑．加入8一羥基喹啉使酚層呈黃色，又可作為識別的標記．

實驗操作：

l. 樣品加入等體積和酚或酚／氯仿（1：1）混合液．

2. 上下顛倒很勻．

3. 室溫，12000轉／分鐘，離心5分鐘．如蛋白質較多或分界不清時，可離心10分鐘。

4. 吸取上層（水層）移置另一新的離心管中．

5. 加入等體積酚／氯仿／異戊酸（25：24：1）溶液．重復步驟2、 3、 4．

6. 加入等體積氯仿／異戊酸（24：1）溶液．重復步驟2、3、 4。

7. 乙醇沉淀核酸（見核酸的沉淀純化）．