DNA的Feulgen染色法

1.目的與原理

實驗目的：

學習DNA的Feulgen染色方法，觀察染色結果，了解反應原理。

實驗原理：

DNA經弱酸(1mol／L HCl)水解，其上的嘌呤堿和脫氧核糖之間的鍵打開，使脫氧核糖的一端形成游離的醛基，這些醛基在原位與Schiff試劑(無色品紅亞硫酸溶液)反應，形成紫紅色的化合物，使細胞內含有DNA的部位呈紫紅色陽性反應。紫紅色的產生，是由于反應產物的分子內含有醌基，醌基是一個發色團，所以具有顏色。對照組預先用熱三氯醋酸或DNA酶處理，抽提去細胞中的DNA而得到陰性反應，從而證明了Feulgen反應的專一性。

2.實驗用品

材料：

（1）．Carnoy液固定的鼠肝石蠟切片

（2）．Carnoy液固定的洋蔥根尖或蠶豆根尖切片。

試劑：

（1）．Carnoy固定液：3份95％酒精加入1份冰醋酸。

（2）．1 mol／L HCl：取比重1．18的濃HCl 82．5ml，加水至100ml。

（3）．Schiff試劑

先將200ml蒸餾水煮沸，由火上取下，加入堿性品紅1g，充分攪拌，有助于溶解。待先將200ml蒸餾水煮沸，由火上取下，加入堿性品紅1g，充分攪拌，有助于溶解。待亞硫酸鉀或偏亞硫酸鈉充分振蕩后蓋緊瓶塞，放于暗處過夜。次日取出，呈淡黃色或近于無色，加中性活性炭一匙，約0．5g，劇烈振蕩1min，過濾后即得無色品紅。無色品紅配成后須塞緊瓶塞。外包黑布或黑紙，貯存在冰箱或黑暗低溫處。

（4）．亞硫酸水溶液(漂白液)

10％偏重亞硫酸鈉水溶液5ml，蒸餾水100ml，1 mol/L HCl 5ml，搖勻，塞緊瓶塞。此溶液在使用前配制，否則會因二氧化硫的逸出而失效。

（5）．5％三氯醋酸

（6）．0．5％固綠酒精溶液(95％酒精溶解)

3.實驗方法：

石蠟切片→溶臘二甲苯Ⅰ（3～5min）→溶臘二甲苯Ⅱ（3～5min）→1/2純酒精＋1/2二甲苯（3～5min）→純酒精Ⅰ（2～3min）→純酒精Ⅱ（2～3min）→95％酒精 （2～3min）→83％酒精（2～ 3min）→70％酒精（2～3min）→蒸餾水→5％三氯醋酸，90℃，15min→70％酒精（2～3min）→蒸餾水（過一下）→1mol/L HCl 60℃，8～15min（水浴或溫箱中）→Schiff試劑（60～90min）→亞硫酸水（Ⅰ Ⅱ Ⅲ）（各5min）→流水沖洗（5～15min）→蒸餾水→0.5％固綠水溶液（復染）（1min）（此步要快，以免過染）→蒸餾水→70％酒精→83％酒精→95％酒精→純酒精Ⅰ→純酒精Ⅱ→透明二甲苯Ⅰ→透明二甲苯Ⅱ→封片（貼上標簽，注明材料，反應名稱，作者姓名及日期）

顯微鏡下檢查：

實驗組：細胞核呈紫紅色，核仁及細胞質呈綠色

對照組：由于DNA被提取破壞，所以細胞核無紫紅色。