為什么出現多條帶?
為什么出現多條帶,每個加樣槽中都出現了多條帶,而且好像都很有規律,為什么?是封閉時間不夠嗎?做Western必須要內參嗎?一抗、或二抗抗體濃度太高,多克隆抗體本身的非特異性反應,抗體的特異性不強,目的蛋白經過處理后發生變化,而內參的條帶基本均勻一致,這樣才有說服力。表明的確是處理因素造成目的蛋白的變化而不是加樣誤差或人為造成目的條帶濃度的變化,嚴格意義上講,內參是必須的。......閱讀全文
為什么出現多條帶?
為什么出現多條帶,每個加樣槽中都出現了多條帶,而且好像都很有規律,為什么?是封閉時間不夠嗎?做Western必須要內參嗎?一抗、或二抗抗體濃度太高,多克隆抗體本身的非特異性反應,抗體的特異性不強,目的蛋白經過處理后發生變化,而內參的條帶基本均勻一致,這樣才有說服力。表明的確是處理因素造成目的蛋白的變
western-blot為什么出現兩條帶
Western blot出現兩條帶是經常會發生的情況具體原因可能是該蛋白出現了同源二聚體,故都可以被抗體識別出來或者改蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗體結合另外抗體特異性不高,也會出現非特異性的結合,造成出現兩條或者多條帶所以Western blot會出現兩條帶
western-blot為什么出現兩條帶
Western blot出現兩條帶是經常會發生的情況具體原因可能是該蛋白出現了同源二聚體,故都可以被抗體識別出來或者改蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗體結合另外抗體特異性不高,也會出現非特異性的結合,造成出現兩條或者多條帶所以Western blot會出現兩條帶
western-blot為什么出現兩條帶
Western blot出現兩條帶是經常會發生的情況具體原因可能是該蛋白出現了同源二聚體,故都可以被抗體識別出來或者改蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗體結合另外抗體特異性不高,也會出現非特異性的結合,造成出現兩條或者多條帶所以Western blot會出現兩條帶
western-blot為什么出現兩條帶
Western blot出現兩條帶是經常會發生的情況具體原因可能是該蛋白出現了同源二聚體,故都可以被抗體識別出來或者改蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗體結合另外抗體特異性不高,也會出現非特異性的結合,造成出現兩條或者多條帶所以Western blot會出現兩條帶
western-blot為什么出現兩條帶
Western blot出現兩條帶是經常會發生的情況具體原因可能是該蛋白出現了同源二聚體,故都可以被抗體識別出來或者改蛋白有部分降解,但是未降解部分依然可以和抗體結合另外抗體特異性不高,也會出現非特異性的結合,造成出現兩條或者多條帶所以Western blot會出現兩條帶
為什么pcr陰性總有條帶出現
提高退火溫度,或重新設計引物,或者是陰性對照被污染,當然還有其它好多小原因,要是還沒解決,請細說并追問。
為什么marker條帶出現不規則的條帶(如啞鈴狀等)?
出現上述情況,多與以下幾個原因有關:電泳緩沖液陳舊。老化的電泳緩沖液離子濃度降低,pH值上升,緩沖能力減弱,從而影響電泳效果,建議經常更換電泳緩沖液;2. 電泳條件不合適。電泳時電壓應不超過20V/cm,電壓太高可能也會導致marker條帶出現不規則現象。此外,凝膠質量差以及凝膠冷卻時凝固不均勻也會
為什么Western-blot-出現兩個目標蛋白條帶
1.因為WB的一抗識別的蛋白質的表位是順序表位,不是空間表位,所以WB狀態下的抗原-抗體識別,與非變性的生理條件下的抗原-抗體識別不同。2.WB之前,先用分子篩純化同時也是檢測一下目的蛋白產物是否成功。也就是目的蛋白是否成功表達了,而且在提取后穩定存在了。3.非特異性的條帶分子量偏大可能是SDS P
為什么電泳的一個泳道出現兩條條帶
應該是PCR的雜帶。這種情況的原因可能很多,比如引物設計的特異性不好,或者退火溫度不合適等。
為什么電泳的一個泳道出現兩條條帶
應該是PCR的雜帶。這種情況的原因可能很多,比如引物設計的特異性不好,或者退火溫度不合適等。
PCR擴增后沒有出現條帶
沒有條帶說明沒有PCR產物,應該是PCR階段原料準備處理線遺漏,建議回憶一下實驗過程,重新制備
PCR擴增后沒有出現條帶
沒有條帶說明沒有PCR產物,應該是PCR階段原料準備處理線遺漏,建議回憶一下實驗過程,重新制備
做western-條帶老是出現反白
做western條帶老是出現反白可能的原因是化學發光是個耗能過程,局部能量消耗過大,導致能量不足,也就發不出光了,所以條帶反白。降低一抗、二抗濃度,蛋白上樣量也可以降低。
為什么電泳的條帶很粗?
電泳中條帶很粗是常見的事,主要是未濃縮好的原因。處理辦法:適當增加濃縮膠的長度;保證濃縮膠貯液的pH正確(6.7);適當降低電壓;
為什么marker條帶非常弱或者根本沒有條帶?
出現上述情況可能是:marker上樣量較低,可適當增加上樣量;2. 凝膠質量較差或凝膠凝固不均勻也會導致電泳條帶弱或根本沒有條帶;3. 電泳時間過長導致marker條帶跑出凝膠,可縮短電泳時間,降低電壓,增加凝膠濃度。
為什么-pcr后有兩條帶
能否詳細描述一下兩條帶的位置,另外你以什么作為template?cDNA? 因為一般情況下引物二聚體的條帶都是或多或少的存在的。 如果是目的條帶有兩條,那么可能是引物出現了錯配,也有可能是本身就有兩種可能。回收測序即可。 追問: 兩條帶距離很近,一條很亮一條很暗,用的DNA基因組 回答: 基因組DN
PCR產物條帶不清晰,為什么
有很多原因。如果目的條帶比較單一且沒有雜帶,說明循環數偏低,可以適當增加循環數;如果雜帶多,目的條帶看不清或者很弱,說明整個擴增體系或反應程序有問題,需要優化PCR體系和程序。
pcr-陰性對照出現條帶,怎么辦
這個是分子實驗室常見問題,有人說是由于氣溶膠引起的假陽性。首先要防止污染,其次要優化PCR體系及反應程序。
蛋白marker為什么能作為顯色條帶
蛋白marker可分為:一、未預染的Marker即寬分子量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準;二、預染的Marker即單色預染和多色預染。在western Blot過程中,分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節,然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。這個 Wes
RNA電泳點樣孔有條帶為什么
1.總RNA可能有蛋白或者多糖等雜質污染,這些雜質阻礙核酸的出孔,使其滯留在加樣孔附近,導致加樣孔發亮2.梳子不干凈,梳子長期使用后上面積攢了大量的EB或者其他雜質,用之前用水沖一沖3.點樣量過大或者電壓過大等原因,都會導致核酸出孔受阻,使得加樣孔發亮
為什么酶切后沒有條帶
什么酶呢?最后酶切組的電泳條帶是彌散,是只有質粒條帶沒有酶切產物條帶,還是干脆就是空白?如果是彌散,最有可能的是所用的酶的反應條件要求比較嚴格,因為掌握不當而產生了星號活性,導致把質粒切碎了。建議查一下所用酶的酶切條件。如果是有質粒條帶而沒有短片段條帶,也就是說沒切開了。可能酶切位點發生了突變,也可
蛋白marker為什么能作為顯色條帶
蛋白marker可分為:一、未預染的Marker即寬分子量蛋白標準、高分子量蛋白標準以及低分子量蛋白標準;二、預染的Marker即單色預染和多色預染。在western Blot過程中,分子量Marker就像個螺絲釘一樣沒雖然是個小細節,然而就是這樣一個小細節對實驗結果有著不可忽視的作用。這個 Wes
溶解曲線為什么出現雙峰
溶解曲線的意思是:當溫度高于擴增產物的TM值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化,比如你用的是TAQMAN探針,taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的TAQ酶剪切斷而產生的,那么在只有溫度變化的情況下,是
溶解曲線為什么出現雙峰
溶解曲線的意思是:當溫度高于擴增產物的TM值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化,比如你用的是TAQMAN探針,taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的TAQ酶剪切斷而產生的,那么在只有溫度變化的情況下,是
溶解曲線為什么出現雙峰
溶解曲線的意思是:當溫度高于擴增產物的TM值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化,比如你用的是TAQMAN探針,taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的TAQ酶剪切斷而產生的,那么在只有溫度變化的情況下,是
溶解曲線為什么出現雙峰
溶解曲線的意思是:當溫度高于擴增產物的TM值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化,比如你用的是TAQMAN探針,taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的TAQ酶剪切斷而產生的,那么在只有溫度變化的情況下,是
溶解曲線為什么出現雙峰
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溶解曲線為什么出現雙峰
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溶解曲線為什么出現雙峰
溶解曲線的意思是:當溫度高于擴增產物的TM值時,雙鏈產物變單鏈,熒光值因為這樣的變化而產生變化,根據這一原理,你推算你的體系是是否會在溫度變化時產生熒光值的變化,比如你用的是TAQMAN探針,taqman探針產生熒光變化的原理是探針被外切酶活性的TAQ酶剪切斷而產生的,那么在只有溫度變化的情況下,是