配制電解質梯度膠實驗
試劑、試劑盒 本方法包括方案 8 中所有物品加上: 甲酰胺(100%)離子梯度膠醋酸鈉實驗步驟 材料本方法包括方案 8 中所有物品,加上:甲酰胺(100%)離子梯度膠用 1XTBE 配制,有無甲酰胺均可。關于含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝膠,請見方案 9。醋酸鈉(3mol/L,PH7.0)方法1. 依方案 8 步驟 1~8。2. 在實驗桌的工作區上鋪上襯塑料的保護紙。3. 參照方案 8 或 9 配制變性聚丙烯酰胺凝膠。4. 將膠放在電泳裝置中。在上槽中加入 0.5XTBE 緩沖液,在下槽中加入 1 份 3mol/L 醋酸鈉和 2 份 1XTBE。按照方案 11 操作。電泳時,指示染料的移動逐漸變慢,當溴酚藍到達底部時,移動幾乎停止。一般,繼續電泳直到二甲苯藍離底部只有 5~10 cm 而溴酚藍到了底部。......閱讀全文
配制電解質梯度膠實驗
? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 本方法包括方案 8 中所有物品 加上: 甲酰胺(100%) 離子梯度膠 醋酸鈉 實驗步驟
配制電解質梯度膠實驗
試劑、試劑盒 本方法包括方案 8 中所有物品加上: 甲酰胺(100%)離子梯度膠醋酸鈉實驗步驟 材料本方法包括方案 8 中所有物品,加上:甲酰胺(100%)離子梯度膠用 1XTBE 配制,有無甲酰胺均可。關于含甲酰胺的聚丙烯酰胺凝膠,請見方案 9。醋酸鈉(3mol/L,PH7.0)方法1. 依方案
配制電解質梯度膠實驗
Sheen 和 Seed(1980) 創造了一種既聰明又簡單的改進方法,利用頂部和底部不同濃度的電泳緩沖液在膠中產生離子梯度,而膠本身的濃度是一定的。利用此法,從單塊凝膠上可以讀取的核苷酸總數可增加約 30%。本實驗來源于分子克隆實驗指南(第三版)下冊,者:〔美〕J. 薩姆布魯克 D.W. 拉塞爾。
如何配制sdspage梯度膠
操作步驟( 1 )在制板支架上置一專用有機玻璃槽,將固定好的玻璃板下部插入槽內,中部用兩個文具夾固定在支架豎板上。在槽內倒入已充分溶化的瓊脂,冷凝后封閉膠腔底部。( 2 )用直徑約 2mm 的聚乙烯管連接好梯度混合器、恒流泵、凝膠模。( 3 ) 30% 膠液的配制取 50ml 燒杯一只,加凝膠貯液①
變性凝膠電泳實驗——電解質梯度測序膠
實驗方法原理通過簡單地提高下槽緩沖液的鹽濃度,使凝膠底部的離子強度得以提高,在電泳過程中,鹽離子可以電泳進入凝膠并產生重復性好的及有效的梯度。實驗材料DNA試劑、試劑盒TBE乙酸鈉儀器、耗材電泳儀實驗步驟1. ?按基本方案步驟1~22灌制凝膠及進行預電泳,但上槽緩沖液為0.5×TBE,下槽為1×TB
固相pH梯度等電聚焦實驗——制膠
實驗方法原理固相 pH 梯度凝膠是由固相 pH 梯度介質(丙烯酰胺衍生物)共價結合到聚丙烯酰胺凝膠中并形成 pH 梯度,所以制膠過程比載體兩性電解質凝膠復雜。灌膠的方法與常規聚丙烯酰胺梯度凝膠和 SDS 梯度凝膠相似。高質量的凝膠介質和固相 pH 梯度介質,聚合過程以及漂洗對固相 pH 梯度凝膠是非
濃縮膠的配制方法
一般同工酶可選擇7?5%~10%的膠(過氧化物酶和酯酶7?5%較合適,超氧化物歧化酶用10%,可溶性蛋白可根據需要配制)。將配制好的凝膠液置真空干燥器中,抽氣10Min,再加入TEMED15μl;混勻后用一細玻棒引流,沿無凹槽的玻板緩緩注入膠室中,注膠過程要防止氣泡產生。膠液加到離凹槽3CM處為止,
SDSPAGE梯度膠怎么配置
操作步驟( 1 )在制板支架上置一專用有機玻璃槽,將固定好的玻璃板下部插入槽內,中部用兩個文具夾固定在支架豎板上。在槽內倒入已充分溶化的瓊脂,冷凝后封閉膠腔底部。( 2 )用直徑約 2mm 的聚乙烯管連接好梯度混合器、恒流泵、凝膠模。( 3 ) 30% 膠液的配制取 50ml 燒杯一只,加凝膠貯液①
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦實驗
實驗方法原理?利用蛋白質分子或其他兩性分子的等電點的不同,在一個穩定的、連續的、線性 pH 梯度中進行蛋白質的分離和分析。所以利用等電聚焦技術分析的對象只限于蛋白質和兩性分子。分析的條件是凝膠中有穩定的、連續的和線性的 pH 梯度。試劑、試劑盒?丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液儀器、耗材?注射器水浴實驗
變性凝膠電泳實驗——緩沖液梯度測序膠
實驗方法原理在本實驗方案,測序膠底部的緩沖液濃度大于其頂部濃度,使得短寡核苷酸片段(膠底部)的遷移率相對比長寡核苷酸(頂部)的遷移率要慢一些,這洋凝膠可電泳更長的時間而不至于短核苷醆從底部走失并改善了長核苷酸鏈的分離度。實驗材料DNA試劑、試劑盒TEMEDSDSTBE儀器、耗材燒杯電泳儀實驗步驟1.
理化所開發出梯度凝膠電解質
水系鋅離子電池(AZIBs)具有安全性高、價格低廉、體積能量密度高等特點,在未來大規模儲能應用中頗具潛力。然而,鋅負極面臨嚴重的腐蝕、析氫以及枝晶生長等問題,造成可逆性差、循環壽命短,阻礙了AZIBs的實際應用。因此,亟需開發離子遷移數高且與電極界面相容性好的新型電解質。 近日,中國科學院理化
變性條件下的凝膠電泳實驗——梯度膠凝膠電泳
實驗方法原理在凝膠電泳中使用丙烯酰胺梯度膠比使用線性膠有兩大優點。一是在高濃度丙烯酰胺條件下可以增加蛋白質的分子篩作用,從而使低分子量蛋白質形成淸晰的條帶。另一是梯度膠可以在塊膠內分離分子量范圍更大的蛋白質(如 5%~20% 的凝膠可以分離 15 kDa~200 kDa 的蛋白質;而 3%~30%
蛋白質的單向SDS凝膠電泳實驗——制備多塊梯度膠
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TEMED丙烯酰胺儀器、耗材離心管電泳儀實驗步驟1. ?如灌制均一濃度凝膠一樣在多板凝膠灌制裝置中組裝好微型膠夾層。?2. ?如圖一、安裝好30 ml 梯度發生器、磁力攪拌器、蠕動泵(可選用)和聚乙烯Tygon管,梯度發生器的輸出端連接于制膠室下方的輸入口。圖一3. ?配制
平衡鹽溶液配制實驗——BSS-的配制實驗
實驗方法原理BSS 是從Ringer 生理鹽水發展起來的,主要由無機鹽和葡萄糖組成。BSS 中的無機離子不僅是細胞生命所需成分,而且對維持滲透壓、緩沖和調節溶液的酸堿度方面,起著重要作用。BSS 內含少量的酚紅,作為溶液酸堿度變化的指示劑;溶液變酸時呈黃色,變堿時呈紫紅色,中性時呈桃紅色,借此易于觀
什么情況下需要用梯度膠分離
根據沉淀顆粒大小或者說密度,以及你的實驗目的來決定。 1、沉淀顆粒大,密度也大,稍微靜置就能夠自然沉降在容器底部,同時,你的目的也只是簡單得將固液進行分離(不回收),那么可以選擇傾析法。 2、你的目的是固液分離的同時,收集濾液
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
實驗方法原理 實驗原理蛋白質分子是典型的兩性電解質分子。它在大于其等電點的 pH 環境中解離成帶負電荷的陰離子,向電場的正極泳動,在小于其等電點的 pH 環境中解離成帶正由荷的陽離子,向電場的負極泳動。這種泳動只有在等于其等電點的 pH 環境中,即蛋白質所帶的凈電荷為零時才能停止。如果在一個
載體兩性電解質pH梯度等電聚焦實驗—薄層分析等電聚焦
實驗方法原理利用蛋白質分子或其他兩性分子的等電點的不同,在一個穩定的、連續的、線性 pH 梯度中進行蛋白質的分離和分析。所以利用等電聚焦技術分析的對象只限于蛋白質和兩性分子。分析的條件是凝膠中有穩定的、連續的和線性的 pH 梯度。試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液儀器、耗材注射器水浴實驗步驟一
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
等電聚焦(Isoelectric focusing,簡稱 IEF)是六十年代中期出現的新技術。近年來等電聚焦技術有了新的進展,已迅速發展成為一門成熟的近代生化實驗技術。目前等電聚焦技術已可以分辨等電點(pI)只差 0.001pH 單位的生物分子。由于其分辨力高,重復性好,樣品容量大,操作簡便迅速,在
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點
等電聚焦電泳法測定蛋白質的等電點 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 實驗原理蛋白質分子是典型的兩性電解質分子。它在大于其等電點的 pH 環境中解離成帶負電荷的陰離子,向電場的
等電聚焦(Isoelectric-focusing,IEF)電泳法測定蛋白質的...
一、實驗目的 了解等電聚焦的原理。通過蛋白質等電點的測定,掌握聚丙烯酰胺凝膠垂直管式等電聚焦電泳技術。 二、實驗原理 等電聚焦(Isoelectric focusing,簡稱IEF)是六十年代中期出現的新技術。近年來等電聚焦技術有了新的進展,已迅速發展成為一門成熟的
聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點
一、目的:學習聚丙烯酰胺凝膠平板等電聚焦電泳測定蛋白質等電點的原理及方法。二、原理:等電點聚焦(isoelectric focusing, IEF)或簡稱電聚焦(electrofocusing),也曾稱等電點分離聚焦電泳等。它是60年代中期出現的技術,克服了一般電泳易擴散的缺點。近年來,等電點聚
Percoll梯度法染色實驗
實驗材料:染色質試劑、試劑盒:精胺、精咪、Percoll、溶液儀器、耗材:聚碳酸酯離心管實驗步驟:1. 在體積為 10 ml 分離得到的染色質物質中加入精胺和精咪至終濃度分別為 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液,勻漿分離得到的染色質。Perco
蔗糖梯度純化法實驗
實驗材料:染色質粗品試劑、試劑盒:聚碳酸酯離心管儀器、耗材:Dounce 勻漿器實驗步驟:準備兩種 18ml,濃度分別為 20% 和 60% 的蔗糖分離緩沖液(聚胺,水相或己二醇法的緩沖液),然后以線性形式加到一 50 ml 的聚碳酸酯離心管中,用梯度生成器形成沿離心管的密度梯度。2. 將染色質粗品
甘油梯度法染色實驗
實驗材料:染色質試劑、試劑盒:甘油、染色質、分離緩沖液溶液儀器、耗材:JS-13 轉桶式轉頭實驗步驟:準備 5 份 6 ml 的 10%、20%、30%、40%、50%(v/v)甘油/染色質分離緩沖液溶液。2. 用 JS-13 轉桶式轉頭在 4℃,1000 r/min 離心 50 分鐘進行染色質梯度
天然培養基配制實驗_膠原的配制
實驗方法原理膠原是細胞生長良好的基質,它是從動物特定組織中用人工法提取出的,利于組織和細胞的固定,亦屬天然培養基。膠原主要用于細胞的附著,能改善細胞表面性質,促細胞生長。膠原可來自大鼠尾腱、豚鼠真皮、牛真皮、牛眼水晶體等,其中以鼠尾膠原最為常用和制備簡便,可配制成0.1%—1%的醋酸溶液,實驗材料鼠
PAGE膠制備方法實驗
實驗試劑1. 5x樣品緩沖液(10ml):0.6ml 1mol/L的Tris-HCl(pH6.8),5ml 50%甘油,2ml 10%的SDS,0.5ml巰基乙醇,1ml 1%溴酚藍,0.9ml蒸餾水。可在4℃保存數周,或在-20℃保存數月。2. 凝膠貯液:在通風櫥中,稱取丙烯酰胺30g,甲叉雙丙烯
固相pH梯度等電聚焦實驗——pH-梯度的測定
試劑、試劑盒丙烯酰胺單體貯液過硫酸銨貯液實驗步驟由于固相 pH 梯度凝膠的導電性很低,不可能用表面電極測定凝膠表面的 pH。但對于寬范圍的固相 pH 梯度可以用等電點蛋白標準來測定,方法同載體兩性電解質等電聚焦。但目前還沒有合適的市售蛋白標準可用于測定窄范圍的固相 pH 梯度。灌制凝膠時,pH 梯度
平衡鹽溶液配制實驗
BSS 的配制實驗 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 BSS 是從Ringer 生理鹽水發展起來的,主要由無機鹽和葡萄糖組成。BSS 中的無機離子不
一維固相-pH-梯度等電聚焦-(IEF-with-IPG)——膠條處理
實驗材料膠條實驗步驟用于2-DE 時,膠條應該散于重泡脹池(圖 3, ld) 中在含 5mol/L 尿素的溶液(或2mol/L 硫脲和 5mol/L 尿素)中泡脹。溶液其成分為 0,5% 到 4% 非離子(NP-40,Triton X-100) 或兩性 (CHAPS) 去污劑、 15mmol/LDT
組織培養常用液的配制實驗—pH調整液的配制實驗
pH調整液的配制實驗試劑、試劑盒NaHCO3HEPES實驗步驟一、NaHCO3液1. ?常用的濃度有7.4%、5.6%、3.7%三種,配制時,用三蒸餾水溶解后,過濾除菌,分裝小瓶,蓋緊瓶塞,4 ℃冰箱或室溫下保存。2. ?或用10 磅10 分鐘高壓蒸氣滅菌亦可;可能有部分NaHCO3被破壞,但操作簡