利用大腸桿菌系統檢測RNA與RNA結合蛋白的相互作用實驗
實驗方法原理 大腸桿菌中異源性的 RNA-BP 與靶 RNA 的結合會抑制靶基因的翻譯。此方法已成功地應用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在內的多種 RNA-BP 的研究中。實驗材料 質粒菌株試劑、試劑盒 X-Gal 儲液IPTG 儲存液lacZ 緩沖液ONPG 溶液碳酸鈉溶液β-巰基乙醇SDS氯仿儀器、耗材 檢測指示板實驗步驟 ―、材料與設備1. 質粒:pREV1,pLacZ-Rep,pACYC184。2. 菌株:WMI 和 WMI/F'。3. X-Gal 儲液:30 mg/ml X-Gal 以二甲基甲酰胺溶解,-20℃ 保存。4. IPTG 儲存液:1 mol/L IPTG 以水溶解,20℃ 保存。5. lacZ 緩沖液:60 mmol/L Na2HPO4,40 mmol/L NaH2PO4,10 mmol/L KCl,1 mmol/L MgSO4(pH 7.0)。6. ONPG 溶液:4 ......閱讀全文
利用大腸桿菌系統檢測RNA與RNA結合蛋白的相互作用實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 大腸桿菌中異源性的 RNA-BP 與靶 RNA 的結合會抑制靶基因的翻譯。此方法已成功地應用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在內的多種 RNA-BP 的研究中。
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實驗方法原理 大腸桿菌中異源性的 RNA-BP 與靶 RNA 的結合會抑制靶基因的翻譯。此方法已成功地應用于包括 HIV Rcv 蛋白和核仁素(nucleolin)在內的多種 RNA-BP 的研究中。實驗材料 質粒菌株試劑、試劑盒 X-Gal 儲液IPTG 儲存液lacZ 緩沖液ONPG 溶液碳酸鈉
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天然RNA文庫篩選與蛋白特異性結合的RNA序列實驗
細胞中,蛋白質與 RNA 結合參與多種生理調控和發育過程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外運,翻譯起始及降解等過程中都存在著蛋白質與 RNA 的直接相互作用。在發育的各個階段,RNA 結合蛋白可以通過與 mRNA 的相互作用調控基因的表達。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛
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實驗方法原理 細胞中,蛋白質與 RNA 結合參與多種生理調控和發育過程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外運,翻譯起始及降解等過程中都存在著蛋白質與 RNA 的直接相互作用。在發育的各個階段,RNA 結合蛋白可以通過與 mRNA 的相互作用調控基因的表達。實驗材料 mRNA寡核苷酸試劑、
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? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 細胞中,蛋白質與 RNA 結合參與多種生理調控和發育過程。在 mRNA 的加帽,多聚腺苷酸化,剪切,核外運,翻譯起始及降解等過程中都存在著蛋白質與 RNA 的直接相互作用。在發育的各個階段,RNA 結合蛋白可以通過與 m
利用-Marligen-總-RNA-快速純化系統純化總-RNA-實驗
由 Marligen Biosciences 提供的 Rapid Total RNA System 可從各種樣品中提取 RNA,且產量和質量非常穩定。本實驗來源于 PCR 實驗指南(第二版),作者:種康,瞿禮嘉。試劑、試劑盒乙醇β-巰基乙醇儀器、耗材轉子-定子均化器或類似設備Marligen Rap
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試劑、試劑盒 乙醇β-巰基乙醇儀器、耗材 轉子-定子均化器或類似設備 Marligen Rapid Total RNA System實驗步驟 一、材料1.緩沖液、溶液和試劑乙醇,70%和100%β-巰基乙醇2.特殊設備轉子-定子均化器或類似設備3.其他Marligen Rapid Total RNA
抑制細菌轉錄終止檢測技術篩選RNA結合蛋白實驗
一種通過篩選重組 cDNA 文庫研究多肽與 RNA 相互作用的細菌抗轉錄終止檢測系統。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法原理一種通過篩選重組 cDNA 文庫研究多肽與 RNA 相互作用的細菌抗轉錄終止檢測系統。實驗材料N-表達質粒E.coil N567 感受態細菌試劑、試劑盒儲
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實驗方法原理 一種通過篩選重組 cDNA 文庫研究多肽與 RNA 相互作用的細菌抗轉錄終止檢測系統。實驗材料 N-表達質粒E.coil N567 感受態細菌試劑、試劑盒 儲存液緩沖液儀器、耗材 蛋白胨培養基蛋白胨平板N-表達質粒組合文庫培養板實驗步驟 ―、材料與設備1. 通過比較 β-半乳糖苷酶表達
環狀RNA結合功能蛋白
環狀RNA作為研究持續火熱的明星分子,不同于對其豐富的表達譜研究,環狀RNA功能機制研究還僅僅處在起步階段。環狀RNA研究多為miRNA海綿機制,部分circRNA可競爭性結合miRNA,解除miRNA對靶基因的抑制作用,上調靶基因的表達。其實,環狀RNA可以通過結合不同種類的功能蛋白,分別在轉錄前
誘騙RNA結合蛋白不與癌細胞中的天然RNA分子結合
科學家也開始變得“狡猾”,開始用欺騙來對抗癌癥。希伯萊大學的研究人員發明了一種誘餌,可以阻止癌癥用于轉移的RNA結合蛋白。 近年來,RNA結合蛋白在腫瘤生長中起著重要作用已經成為不爭的事實。這些蛋白在所有細胞中都很活躍,尤其是在癌細胞中,它們與RNA分子結合,加速癌細胞的生長。不幸的是,目前還
酵母三雜交系統檢測和分析RNA蛋白相互作用實驗
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實驗方法原理 酵母三雜交系統(yeast three-hybrid system)可用于分析蛋白質與 RNA 間的相互作用。在酵母三雜交系統中,RNA 蛋白質相互作用導致報道基因的轉錄,可以通過細胞生長、克隆顏色或特異的酶活性檢測蛋白質與 RNA 的相互作用。試劑、試劑盒 YPD 和 SD 培養基鮭
推動癌癥發展的RNA結合蛋白
最近,一項關于白血病細胞基因表達的研究,發現了一種RNA結合蛋白,在推動癌癥的發展過程中起著重要的作用。該蛋白通常活躍在胎兒組織,在成年人體內是關閉的,但它在一些癌細胞中被再度活化。這種表達模式使它成為抗癌藥物的一個有吸引力的靶標,因為阻斷它的活動,不太可能造成嚴重的副作用。 這項新的研究,發
噬菌體展示技術研究RNA結合蛋白實驗
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噬菌體展示技術研究RNA結合蛋白實驗
實驗方法原理噬菌體展示技術是將外源基因與噬菌體的表面蛋白基因融合,在融合了外源基因的噬菌體顆粒的表面就會表達相應的外源蛋白,即外源基因編碼的蛋白被展示在噬菌體顆粒的表面。實驗材料載體tRNA抗體寡核苷酸試劑、試劑盒抗生素儲存液BCIP葡萄糖儲存液X-Gal磁珠洗液蛋白酶抑制劑RNase 抑制劑TEN
酵母三雜交系統檢測和分析RNA蛋白相互作用
一、引入 RNA 質粒和 cDNA 文庫通常首先將 RNA 質粒轉化到宿主菌株-L40coat 內,得到包含 RNA 質粒的細胞,再轉化一個融合了轉錄激活區的 cDNA 文庫(雜交 RNA 對宿主細胞幾乎沒有毒性,與用于雙雜交篩選的一些雜交蛋白
RNA分離與分析實驗_分離RNA
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噬菌體展示技術研究RNA結合蛋白實驗(一)
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噬菌體展示技術研究RNA結合蛋白實驗(三)
4. 免疫印跡檢測外源蛋白的展示情況pDTSPLAY-B 空載體生成的噬菌體表面不含外源基因,僅有帶有 6 個組氨酸標簽和 Myc 標簽的錨定蛋白(基因 Ⅲ 編碼),此蛋白 SDS-PAGE 中的條帶在 65 kDa 的位置(實際 Mr 為 45 kDa)。pDISPLAY-B 載體中插入外
RIP技術(RNA結合蛋白免疫沉淀)
RIP技術(RNA Binding Protein Immunoprecipitation,RNA結合蛋白免疫沉淀),是研究細胞內RNA與蛋白結合情況的技術,是了解轉錄后調控網絡動態過程的有力工具,能幫助我們發現miRNA的調節靶點。RIP這種新興的技術運用針對目標蛋白的抗體把相應的RNA-蛋白復合
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健康所在RNA結合蛋白調節信使RNA翻譯研究中取得新進展
近日,國際學術期刊Molecular and Cellular Biology在線發表了中科院上海生命科學研究院/上海交通大學醫學院健康所核酸與分子醫學研究組的最新研究進展:AU-Rich Element-Dependent Translation Repression Requires the
液相法篩選cDNA表達文庫中RNA結合蛋白實驗
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將 cDNA 文庫表達的蛋白固定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上,然后用標記的 RNA 對其進行篩選的方法是篩選 RNA 結合蛋白研究中最常用的技術。本實驗來源「RNA 實驗指導手冊」主編:鄭曉飛。實驗方法原理將 cDNA 文庫表達的蛋白固定于硝酸纖維素膜或尼龍膜上,然后用標記的 RNA 對其進行篩選的方法
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