過氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳2
3、不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理系統的不連續性表現在以下幾個方面:(1)凝膠板由上、下兩層膠組成,兩層凝膠的孔徑不同。上層為大孔徑的濃縮膠,下層為小孔徑的分離膠。 濃縮膠:又稱堆積膠。凝膠濃度較小,孔徑相對較大。把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用二被濃縮在一個狹窄的區帶,使樣品組分在分離膠中得以高分辨率的分離。分離膠:又稱電泳膠,通常孔徑較小,通過選擇合適的凝膠濃度,使樣品組分得以很好地分離。分離膠又分為均一膠和梯度膠。(2)緩沖液離子組成及各層凝膠的pH不同。本實驗采用堿性系統。電極緩沖液為pH8.3的Tris-甘氨酸緩沖液,濃縮膠為pH6.7的Tris-HCl緩沖液。而分離膠為pH8.9的Tris-HCl緩沖液。(3)在電場中形成不連續的電位梯度。在這樣一個不連續的系統里,存在三種物理效應,即電荷效應、分子篩效應和濃縮效應。在這三種效應的共同作用下,待測物質被很好地分離開來。下面以本實驗要分離的小麥苗過......閱讀全文
過氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳2
3、不連續聚丙烯酰胺凝膠電泳的原理系統的不連續性表現在以下幾個方面:(1)凝膠板由上、下兩層膠組成,兩層凝膠的孔徑不同。上層為大孔徑的濃縮膠,下層為小孔徑的分離膠。 濃縮膠:又稱堆積膠。凝膠濃度較小,孔徑相對較大。把較稀的樣品加在濃縮膠上,經過大孔徑凝膠的遷移作用二被濃縮在一個狹窄的區帶,使樣品
過氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳3
四、實驗步驟:① 安裝制膠模具(教師演示,學生安裝)注意事項:a、在整個過程中要輕拿輕放,以免將玻璃板弄碎。②制作分離膠(濃度10%)分離膠配方(濃度10%):pH8.9 Tris-HCl溶液:0.8ml分離膠PAG溶液:1.2ml蒸餾水:1.6ml10%TEMED:40μl%AP: 40μl將上述
過氧化物酶同工酶聚丙烯酰胺凝膠電泳1
一、目的 1、了解聚丙烯酰胺凝膠電泳原理 2、了解聚丙烯酰胺凝膠的制作過程 3、了解過氧化物酶同工酶電泳過程 二、實驗原理: 1、電泳原理及影響電泳的主要因素 帶電離子在電場中的泳動速度(1)和遷移率(泳動度)(2)V=E·q·a(1)6πrηu=q·a(2)6πrη由(2)式可以看出,凡能影響溶液
聚丙烯酰胺凝膠電泳分離過氧化物酶同工酶
一、目的同工酶是指能催化同一種化學反應,但其酶蛋白本身的分子結構組成卻有所不同的一組酶。研究表明,植物在發育過程中,所含同工酶的種類和比例都不相同,它們與植物的遺傳、生長發育、代謝調節及抗性等都有一定關系,因此作為基因表達的產物,測定同工酶譜是認識基因存在和表達的一種工具,在植物的種群、發育及雜交遺
植物過氧化物酶同工酶測定
凡能催化同一種化學反應,但其分子結構和帶電性質不同的一組酶稱同工酶(isoenzyme)。同工酶譜的差異是基因表達的差異造成的,所以在研究植物基因調控與生長發育及其與環境條件的關系以及許多生理生化和遺傳問題時,常常要分析同工酶譜的差異。因此,同工酶研究在理論和實踐中都有非常重要的意義。一、原理聚丙烯
藥用植物過氧化物酶同工酶分析及活性比較實驗
聚丙烯酰胺凝膠電泳法實驗方法原理不同種乃至不同變種的生物不但外部形態有變異,由于結構基因的差別,其表達產物酶和蛋白質也必然存在著一定的差別。所以同工酶分析作為一種遺傳分析手段已廣泛應用于品種資源調查、雜交子代測定、種子純度鑒定等農林業各個領域,在指導生產方面發揮了很大的作用。此外,同工酶分析對研究不
藥用植物過氧化物酶同工酶分析及活性比較實驗
聚丙烯酰胺凝膠電泳法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 不同種乃至不同變種的生物不但外部形態有變異,由于結構基因的差別,其表達產物酶和蛋白質也必然存在著一定的差別。所以同工酶分析
藥用植物過氧化物酶同工酶分析及活性比較實驗
實驗方法原理 不同種乃至不同變種的生物不但外部形態有變異,由于結構基因的差別,其表達產物酶和蛋白質也必然存在著一定的差別。所以同工酶分析作為一種遺傳分析手段已廣泛應用于品種資源調查、雜交子代測定、種子純度鑒定等農林業各個領域,在指導生產方面發揮了很大的作用。此外,同工酶分析對研究不同產地、不同種屬生
不同作物不同發育時期過氧化物酶同工酶的比較分析
一、原理 聚丙烯酰胺是由丙烯酰胺(簡稱Acr)和交聯劑甲叉雙丙烯酰胺(簡稱Bis)在催化劑過硫酸銨(AP)和加速劑四甲基乙二胺(簡稱TEMED)的作用下,聚合而成的具有三維網狀結構的凝膠,通過改變聚丙烯酰胺單體的濃度和交聯度可以控制凝膠孔徑的大小。通過改變催化劑的用量,可以控制凝膠聚合的速度。
臨床常用血清酶同工酶及其亞型分析(2)
二、γ-谷氨酰轉移酶及其同工酶(一)生物化學特征g-谷氨酰轉移酶(γ-GT或GGT)又稱γ-谷氨酰轉肽酶(γ-GTP或GGTP),是一種含巰基的線粒體酶。組織分布以腎臟含量最多,其次為胰、肺、肝等。血清中的γ-GT則主要來自肝膽,紅細胞中幾乎無γ-GT,因此溶血對其測定影響不大。(二)測定方法目前國
聚丙烯酰胺凝膠電泳分離過氧化物同工酶
同工酶是指能催化同一種化學反應,但其酶蛋白本身的分子結構組成卻有所不同的一組酶。研究表明,植物在發育過程中,所含同工酶的種類和比例都不相同,它們與植物的遺傳、生長發育、代謝調節及抗性等都有一定關系,因此作為基因表達的產物,測定同工酶譜是認識基因存在和表達的一種工具,在植物的種群、發育及雜交遺傳的研究
什么是同工酶?同工酶的作用
同工酶(isozyme,isoenzyme)廣義是指生物體內催化相同反應而分子結構不同的酶。按照國際生化聯合會(IUB)所屬生化命名委員會的建議,則只把其中因編碼基因不同而產生的多種分子結構的酶稱為同工酶。最典型的同工酶是乳酸脫氫酶(LDH)同工酶。 同工酶的基因先轉錄成同工酶的信使核糖核酸,后者再
同工酶分析
收集細胞,用 D-PBSA 洗滌,重新制成 5×107個/ml 的細胞懸液,制備細胞抽提物并置于 -70°C 保存。準備凝膠裝置,取 1~2 μl的細胞抽提物、標準品及對照點樣于瓊脂糖凝膠。槽內充滿液體,將瓊脂糖凝膠置于其中,電泳 25 min,加入酶反應試劑,孵育 5~20 min 后,沖洗凝膠,
同工酶分析
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 收集細胞,用 D-PBSA 洗滌,重新制成 5×107個/ml 的細胞懸液,制備細胞抽提物并置于 -70°C 保存。準備凝膠裝置,取 1~2 μl的細胞抽提物、標準品及對照點樣于瓊脂糖凝膠。槽內充滿液體,將瓊脂糖凝膠置于其中
同工酶簡介
用電泳方法將LDH同工酶分離,分析其酶譜,發現脊椎動物各組織中有五條酶帶。每條酶帶的酶蛋白都是由四條肽鏈組成的四聚體,LDH有兩類肽鏈,A(M)或B(H),各有不同的免疫性質,按排列組合可形成符合于電泳酶帶數的五種同工酶。LDH1及LDH5分別由純粹的4條B鏈(B4)和4條A鏈(A4)形成,稱為純聚
同工酶分析
實驗方法原理收集細胞,用 D-PBSA 洗滌,重新制成 5×107個/ml 的細胞懸液,制備細胞抽提物并置于 -70°C 保存。準備凝膠裝置,取 1~2 μl的細胞抽提物、標準品及對照點樣于瓊脂糖凝膠。槽內充滿液體,將瓊脂糖凝膠置于其中,電泳 25 min,加入酶反應試劑,孵育 5~20 m
同工酶分析
實驗方法原理 收集細胞,用 D-PBSA 洗滌,重新制成 5×107個/ml 的細胞懸液,制備細胞抽提物并置于 -70°C 保存。準備凝膠裝置,取 1~2 μl的細胞抽提物、標準品及對照點樣于瓊脂糖凝膠。槽內充滿液體,將瓊脂糖凝膠置于其中,電泳 25 min,加入酶反應試劑,孵育 5~20
聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定IgG純度2
③ 分析純過硫酸胺(AP)(AR) 0.14g加重蒸水至100ml,置棕色瓶,4℃儲存僅能用一周,最好當天配制。上述3種試劑用于制備分離膠。④ 濃縮膠緩沖液:稱取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,調pH6.7,用重蒸水定容至100ml,
聚丙烯酰胺凝膠電泳(PAGE)鑒定IgG純度2
④ 濃縮膠緩沖液:稱取1mol/L HCl 48ml,Tris5.98g,TEMED 0.46ml,加重蒸水至80ml,調pH6.7,用重蒸水定容至100ml,置棕色瓶內,4℃貯存。⑤ 濃縮膠貯液:稱Acr10g,Bis2.5g 加重蒸水溶解后定容至100ml,過濾后置棕色瓶內,4℃貯存。⑥ 40%
同工酶的功能
在動、植物中,一種酶的同工酶在各組織、器官中的分布和含量不同,形成各組織特異的同工酶譜,叫做組織的多態性,體現各組織的特異功能。大多數基因性同工酶由于對底物親和力不同和受不同因素的調節,常表現不同的生理功能,例如動物肝臟的堿性磷酸酯酶和肝臟的排泄功能有關,而腸粘膜的堿性磷酸酯酶卻參與脂肪和鈣、磷的吸
同工酶的概念
同工酶(isozyme,isoenzyme)廣義是指生物體內催化相同反應而分子結構不同的酶。按照國際生化聯合會(IUB)所屬生化命名委員會的建議,則只把其中因編碼基因不同而產生的多種分子結構的酶稱為同工酶。最典型的同工酶是乳酸脫氫酶(LDH)同工酶。?同工酶的基因先轉錄成同工酶的信使核糖核酸,后者再
同工酶的分類
基因性或原級由不同基因產生的肽鏈而衍生的同工酶。這里所指的不同基因可以在不同染色體或在同一染色體的不同位點上,例如LDH中A、B兩條肽鏈的基因分別在第11及第12對染色體上,唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1對染色體的不同位點上。這類同工酶因分子結構差異較大,彼此間無交叉免疫。但同工酶的不同基因也可以
同工酶的應用
在生物學中,同工酶可用于研究物種進化、遺傳變異、雜交育種和個體發育、組織分化等。例如最原始的脊椎動物七鰓鰻(Lamprey)只有一種LDH肽鏈,進化到較高級的魚類才有A、B兩類肽鏈。又如通過對地理分布不同的物種間某一同工酶譜的普查可以推測物種的地理來源。動、植物的遺傳變異可通過子代和親代同工酶譜的比
什么是同工酶?
同工酶(isozyme,isoenzyme)廣義是指生物體內催化相同反應而分子結構不同的酶。按照國際生化聯合會(IUB)所屬生化命名委員會的建議,則只把其中因編碼基因不同而產生的多種分子結構的酶稱為同工酶。最典型的同工酶是乳酸脫氫酶(LDH)同工酶。 同工酶的基因先轉錄成同工酶的信使核糖核酸,后
同工酶的分類
基因性或原級由不同基因產生的肽鏈而衍生的同工酶。這里所指的不同基因可以在不同染色體或在同一染色體的不同位點上,例如LDH中A、B兩條肽鏈的基因分別在第11及第12對染色體上,唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1對染色體的不同位點上。這類同工酶因分子結構差異較大,彼此間無交叉免疫。但同工酶的不同基因也可以
同工酶的分類
基因性或原級由不同基因產生的肽鏈而衍生的同工酶。這里所指的不同基因可以在不同染色體或在同一染色體的不同位點上,例如LDH中A、B兩條肽鏈的基因分別在第11及第12對染色體上,唾液淀粉酶和胰淀粉酶的基因在第1對染色體的不同位點上。這類同工酶因分子結構差異較大,彼此間無交叉免疫。但同工酶的不同基因也可以
植物同工酶技術
一、實驗原理 同工酶(isozymes)是指作用于底物相似或完全相同的酶的不同分子形式,即催化同一種反應而結構不同的一族酶。它們是受遺傳體系決定的酶的不同分子形式。利用凝膠電泳技術可以將它們分開,用專一的作用底物和特殊染料,把需要分析的酶染色,在膠柱上呈現同工酶譜。 二、
植物同工酶實驗
一、實驗原理 同工酶(isozymes)是指作用于底物相似或完全相同的酶的不同分子 ? 形式,即催化同一種反應而結構不同的一族酶。它們是受遺傳體系決定的酶的不同分子 ?形式。利用凝膠電泳 ? 技術可以將它們分開,用專一的作用底物和特殊染料,把需要分析的酶染色,在膠柱上呈現同工酶譜。
過氧化物酶體的分離和分析實驗2
從豚鼠小腸黏膜中分離微過氧化物酶體實驗材料黏膜細胞試劑、試劑盒蔗糖TESEDTAPMSF亮抑蛋白酶肽半硫酸鹽儀器、耗材聚四氟乙烯-玻璃勻漿器實驗步驟1. 處死麻醉后的豚鼠,取出全部的小腸(從胃到盲腸),用一只大的(50 ml)皮下注射器灌注冷的勻漿緩沖液來清洗其中的內容物。2. 將小腸切成大約 10
大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶(M2PK)ELISA分析檢測試劑盒...
本試劑僅供研究使用 ?標本:血清或血漿試驗原理:M2-PK試劑盒是固相夾心法酶聯免疫吸附實驗(ELISA).已知M2-PK濃度的標準品、未知濃度的樣品加入微孔酶標板內進行檢測。先將M2-PK和生物素標記的抗體同時溫育。大鼠丙酮酸激酶M2型同工酶ELISA檢測試劑盒洗滌后,加入親和素標記過的HRP。再