LAK/TIL細胞的制備與活性測定
淋巴因子激活的細胞毒性細胞(lymphokine activated killer,LAK)和腫瘤浸潤性淋巴細胞(tumor infiltrating lymphocyte,TIL)在機體的免疫防御中起著十分重要的作用,特別是在腫瘤免疫過繼療法中具有重要的應用前景,其制備及活性的檢測對于評價機體的免疫狀態具有重要的意義。以下主要介紹LAK/TIL制備的常規方法。 (一)主要試劑材料 1.試劑①IL-2;②RPMI-1640;③ Ⅰ、Ⅳ型膠原酶,DNA酶;④四甲基偶氮鹽;⑤酸化異丙醇:含0.04mo1/L HC1的異丙醇;⑥96孔細胞培養板。 易生物試劑庫: 2.腫瘤細胞系Raji細胞、Daudi細胞為B細胞性白血病細胞株;Molt-4為T細胞性白血病細胞,對LAK細胞敏感,而對NK細胞毒作用不敏感;K562為紅白血病細胞株,對NK細胞毒作用敏感。所有細胞株均培養在含10%~20% NCS的RPMI-1......閱讀全文
125IUdR釋放試驗測定NK細胞活性
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 25I-UdR(125I-2′脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的類似物,作為DNA合成的前體物,能相當特異地取代胸腺嘧啶核苷摻入到細胞核DNA鏈上。因此,可用125I-UdR標記體外傳代培養的腫瘤細胞作為靶細胞,以外周血分離的單個
簡述NK細胞活性測定(NK)的檢查過程
一、NK細胞活性測定(NK)的檢查過程: 取傳代后24h生長良好的YAC-1細胞(存活率>95%)按1×106/mL YAC-1細胞懸液加3H-TdR 10uCi進行標記,于37℃、5%CO2培養箱中培養2h,每30min振蕩1次。標記后的細胞用培養液洗滌3次,重懸于培養液中,使細胞濃度為1×
NK細胞活性測定:LDH法原理和實驗步驟
一、原理?活細胞的胞漿內含有LDH。正常情況下,LDH不能透過細胞膜,當細胞受到NK細胞的殺傷后,LDH釋放到細胞外。LDH 可使乳酸鋰脫氫,進而使NAD還原成NADH,后者再經遞氫體吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)還原碘硝基氯化四氮唑(INT),INT 接受H+被還原成紫紅色甲月贊類化合物。在酶
簡述NK細胞活性測定(NK)的臨床意義
一、NK細胞活性測定(NK)的臨床意義: 異常結果:受試樣品組的NK細胞活性顯著高于對照組的NK細胞活性,可判定該項試驗結果陽性。活性升高,常見于病毒感染的早期,Down綜合征,接受器官移植、骨髓移植的患者等及免疫增強劑治療患者。活性降低,常見于惡性腫瘤、重癥聯合免疫缺陷病,AIDS和免疫抑制
免疫學實驗NK細胞活性測定(NK)介紹
NK細胞活性測定(NK)介紹: 自然殺傷(NK)細胞是一群異質性多功能的免疫細胞,是與特異性免疫應答無關的自然毒殺傷細胞。它對體內多種細胞,特別是T、B淋巴細胞有調節作用。它所介導的裂解細胞作用不受主要組織相溶性復合體的限制。自然殺傷細胞不僅對癌細胞,對病毒、胞內寄生菌和老化變異細胞也具有極強
NADPH細胞色素C(P450)活性測定
實驗材料 肝微粒體蛋白試劑、試劑盒 DADPH磷酸緩沖液細胞色素C儀器、耗材 比色池秒表試管試管架紫外分光光度計
125IUdR釋放試驗測定NK細胞活性
實驗方法原理25I-UdR(125I-2′脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的類似物,作為DNA合成的前體物,能相當特異地取代胸腺嘧啶核苷摻入到細胞核DNA鏈上。因此,可用125I-UdR標記體外傳代培養的腫瘤細胞作為靶細胞,以外周血分離的單個核細胞或小鼠脾細胞作為效應細胞,進行體外NK細胞活性檢測。被
125IUdR釋放試驗測定NK細胞活性
自然殺傷(NK)細胞參與了機體免疫防御的第一道防線,主要用于(1)免疫監視系統中抗腫瘤抗病毒(2)免疫調控。實驗方法原理25I-UdR(125I-2′脫氧尿嘧啶核苷)是胸腺嘧啶核苷的類似物,作為DNA合成的前體物,能相當特異地取代胸腺嘧啶核苷摻入到細胞核DNA鏈上。因此,可用125I-UdR標記體外
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗4
測定[γ-32P]ATP的比活性實驗步驟準備下列材料:含有未知濃度mp] ATP的細胞裂解物樣品10mg/ml激酶底物肽漸夜(Calbiochem)0.5mraol/L cAMP 溶液 I、Calbiochem)cA-PrK (Calbiochem)cA-PrK分析緩沖液lmol/L DTT儲存液(
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗1
從標記的細胞或者細胞裂解物中提取ATP實驗步驟1.從標記細胞提取ATP1)? 備下列材料:本實驗用到的所有溶液必須用Mlli - Q純化的水或它的等價物配制。冰冷的4%高氣酺(v/v)三-n-辛胺1,1,2-三氮三m乙烷32p標記的細胞帶螺帽的聚丙烯離心管測量范圍PH4~8的PH試紙小心:高氣酸■
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗2
用發光分析定量測定ATP實驗步驟Sigma公司提供了 -種測定MP濃度的非常簡單,靈敏&又方便的方法。其原理是用熒光素酶從熒光素和ATP中產生光。在熒光素/榮光素酶濃度恒定的情況下,可以繪制一條不同ATP濃度時產光量變化的標準曲線,因此可以很容易地對來自細胞裂解物的未知樣品進行定量。然而,如果要測定
透化細胞和退化細胞器中測定比活性實驗3
用高效液相層析定量測定ATP實驗步驟1)準備下列材料:Whatman Partisphere SAX高效液相層析柱和保護柱線性梯度洗脫液設定在254nm的紫外線監測儀裝配好的0.2;mi Whatman濾膜和濾器0.2^?過濾的Milli-Q水0.2/im S@_0,:5m〇l/LNH4H2ro4
癌癥免疫療法最新進展:TIL(腫瘤浸潤淋巴細胞)
高通量測序技術促進了癌癥和免疫學的研究,以及個體化免疫治療的發展,比如說,高通量測序極大地促進了我們對癌癥基因組,腫瘤發生過程中細胞內機制的了解,而且癌癥基因組分析還揭示了免疫系統能靶向的抗原表位。同時測序也可以用于確定免疫組庫,實時,高敏感地監控對腫瘤生長或治療產生應答的克隆擴增和細胞群體濃度
酶活性測定實驗
實驗方法原理U/L=K?ΔA/min實驗步驟1. 誘導試劑.2. 開機預溫達37度.3. 選取測定程序.4. 測試:加入試劑準確計的30秒后測定讀取吸光度.以后每隔30秒測定一次.5. 實驗結果:計算ΔA/min求出測定結果.
轉氨酶活性的測定
(一)原理轉氨酶是體內重要的一類酶。轉氨酶催化α–氨基酸的α–氨基與α–酮酸的α–酮基之間的相互轉化,從而生成一種新的氨基酸與一種新的酮酸,這種作用稱為轉氨基作用。它在生物體內蛋白質的合成、分解等中間代謝過程中,在糖、脂及蛋白質三大物質代謝的相互聯系、相互制約及相互轉變上都起著很重要的作用。在動物機
酶活性測定實驗
實驗方法原理U/L=K?ΔA/min實驗步驟1. 誘導試劑.2. 開機預溫達37度.3. 選取測定程序.4. 測試:加入試劑準確計的30秒后測定讀取吸光度.以后每隔30秒測定一次.5. 實驗結果:計算ΔA/min求出測定結果.
轉氨酶活性的測定
實驗概要本實驗介紹了轉氨酶活性測定的原理及方法等。實驗原理轉氨酶是體內重要的一類酶。轉氨酶催化α–氨基酸的α–氨基與α–酮酸的α–酮基之間的相互轉化,從而生成一種新的氨基酸與一種新的酮酸,這種作用稱為轉氨基作用。它在生物體內蛋白質的合成、分解等中間代謝過程中,在糖、脂及蛋白質三大物質代謝的相互聯系、
如何分析流式細胞術測定活性氧結果
活性氧檢測試劑盒(Reactive oxygen species assay kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細
NK細胞活性測定實驗——乳酸脫氫酶釋放法
實驗方法原理乳酸脫氫酶(LDH)存在于細胞內,正常情況下,不能透過細胞膜。當細胞受到損傷時,由于細胞膜通透性改變,LDH可從細胞內釋放至培養液中。釋放出來的LDH再催化乳酸的過程中,使氧化型輔酶Ⅰ(NAD+)變成還原型輔酶(NADH2),后者再通過遞氫體-吩嗪二甲酯硫酸鹽(PMS)還原碘硝基氯化氮唑
如何分析流式細胞術測定活性氧結果
活性氧檢測試劑盒(Reactive oxygen species assay kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細
臨床化學檢查方法介紹NK細胞活性測定(NK)介紹
NK細胞活性測定(NK)介紹: 自然殺傷(NK)細胞是一群異質性多功能的免疫細胞,是與特異性免疫應答無關的自然毒殺傷細胞。它對體內多種細胞,特別是T、B淋巴細胞有調節作用。它所介導的裂解細胞作用不受主要組織相溶性復合體的限制。自然殺傷細胞不僅對癌細胞,對病毒、胞內寄生菌和老化變異細胞也具有極強的清
如何分析流式細胞術測定活性氧結果
活性氧檢測試劑盒(Reactive oxygen species assay kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細
NK細胞活性測定實驗——放射性核素釋放
實驗方法原理用放射性核素標記靶細胞,當靶細胞受到破壞時,放射性核素被釋放出來,通過測定釋放或殘留在未被破壞細胞內的放射性核素放射活性,即可計算和推測殺傷細胞的細胞毒活性。常用的放射性核素有51Cr、3H-Dr、125I-UdR等。本實驗采用51Cr釋放法檢測人NK細胞活性。實驗材料靶細胞試劑、試劑盒
如何分析流式細胞術測定活性氧結果
活性氧檢測試劑盒(Reactive oxygen species assay kit)是一種利用熒光探針DCFH-DA進行活性氧檢測的試劑盒。DCFH-DA本身沒有熒光,可以自由穿過細胞膜,進入細胞內后,可以被細胞內的酯酶水解生成DCFH。而DCFH不能通透細胞膜,從而使探針很容易被裝載到細胞內。細
煤炭活性測定儀測定方法
煤炭活性測定儀測定方法:煤炭活性測定儀又名活性炭測定儀,是由鶴壁市創新儀器儀表有限公司(134.6199.6830)研發的新一代測定煤對二氧化碳反應性的儀器,也是煤炭氣化研究的常用儀器之一。該儀器具有升溫速度快、保溫性能好、控溫準確、靈敏等優點,符合GB/T220-2001《煤對二氧化碳化學反應性的
細胞活性檢測Orangu?細胞計數
Orangu?計數法Orangu? solution(Cell Guidance,貨號:OR01-500)是一種無細胞毒性、高靈敏度、比色法,用于測定細胞增殖和細胞毒性的細胞活性試劑。利用WST-8(細胞代謝的一種水溶性的四唑鹽)在細胞內線粒體脫氫酶作為電子介質的情況下,它被還原為橙色的甲瓚染料,且
藥物對動物體內淋巴細胞增殖影響實驗
實驗方法原理 TIL 是繼LAK 之后的第2 代抗腫瘤效應細胞,是近來實驗研究及臨床應用的熱點之一。目前常規加入IL- 2對TIL 進行培養,但是隨著培養時間的延長,TIL 的增殖活性和抗腫瘤活性都有所降低。實驗材料 荷瘤小鼠試劑、試劑盒 RPMI 1640 培養液小牛血清儀器、耗材 剪刀離心管離心
藥物對動物體內淋巴細胞增殖影響實驗
實驗方法原理TIL 是繼LAK 之后的第2 代抗腫瘤效應細胞,是近來實驗研究及臨床應用的熱點之一。目前常規加入IL- 2對TIL 進行培養,但是隨著培養時間的延長,TIL 的增殖活性和抗腫瘤活性都有所降低。實驗材料荷瘤小鼠試劑、試劑盒RPMI 1640 培養液小牛血清儀器、耗材剪刀離心管離心機實驗步
細胞因子生物學活性測定法的特點
①敏感性較高; ②特異性不高; ③操作繁瑣; ④易受干擾。
NK細胞活性測定:同位素法原理和實驗步驟
一、原理?將用同位素3H-TdR標記的靶細胞與淋巴細胞共同培養時,靶細胞可被NK細胞殺傷。同位素便從被殺傷的靶細胞中釋放出來,其釋放的量與NK細胞活性成正比。通過測定靶細胞3H-TdR的釋放率即可反應NK細胞的活性。?二、儀器和材料?液體閃爍儀、多頭細胞取集器、二氧化碳培養箱、3H-TdR、RPMI