攻克多重PCR之難（下篇）
多重PCR能夠在提高通量的同時節省樣品降低成本，它需要耗費更多的時間和精力，同時也會給用戶回報更豐富的數據。本文介紹了一些實驗技巧和商業化工具，希望能幫您輕松獲得好結果。 原則三、四、五：優化dNTP、MgCl2、聚合酶和鹽的濃度 現在剩下的就是調整反應條件了。要一次進行這么多種反應，我們當然不想在反應中缺了哪個組分。一般多重PCR需要更多的dNTP、鎂離子和聚合酶。 Nichols推薦使用0.3 mM dNTP(而非標準的0.2 mM)、2.5 mM Mg2+(而非1.2至2 mM)以及每50μL反應體系5 units聚合酶(而非1.25 units)。最后再試試鹽濃度，“在優化的時候，增加鹽總會有幫助，尤其能增加特異性。” PCR master mix含有緩沖液、鹽、dNTP、Mg和聚合酶，如果我們使用常規1.25× 或1.5×的PCR master mix就已經差不多做到了上述原則的三至五......閱讀全文
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶；(2)依賴RNA的DNA聚合酶；(3)依賴DNA的RNA聚合酶；(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶，它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；D
聚合酶的分類
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶；(2)依賴RNA的DNA聚合酶；(3)依賴DNA的RNA聚合酶；(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶，它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；DNA
安捷倫被拆分－你不知的安捷倫歷史
2000s 2000年 2000年6月2日，惠普把其擁有的安捷倫股份分配給惠普股東，安捷倫科技完全獨立。 安捷倫光子交換平臺問世，加速了全光學網絡的發展。 凈營業收入：108億美元;員工人數：47,000。 2001年 惠普創始人William R. He
聚合酶鏈[式]反應
中文名稱聚合酶鏈[式]反應英文名稱polymerase chain reaction;PCR定 義通過DNA互補雙鏈解鏈、退火和聚合延伸的多次循環來擴增DNA特定序列的方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
DNA聚合酶的特性
良好的熱穩定性;70℃ 2h，殘留90%活性;93℃ 2h，殘留60%活性;94℃ 2h，殘留40%活性。5'→3'聚合酶活性，對dATP有優先聚合活性;5'→3'外切酶活性;無3'→5'外切酶活性。
定量聚合酶鏈反應
中文名稱定量聚合酶鏈反應英文名稱quantitative PCR;qPCR定 義將某種已知含量的DNA模板作為內標準進行PCR反應，對待測模板進行定量分析的方法。更靈敏的定量PCR是采用實時PCR方法。應用學科細胞生物學（一級學科），細胞生物學技術（二級學科）
聚合酶的功能特性
聚合作用在引物RNA'-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的專一性主要表現為新進入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有催化作用。dNTP進入結合位點后，可能使酶的構象發生變化，促進3'-OH與5
RNA聚合酶的類別
通常可根據生物的類別，將RNA聚合酶分為原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特點，但在結構、組成和性質等方面又不盡相同。（1）原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大腸桿菌RNA聚合酶。該酶是由五種亞基組成的六聚體（α2ββ'ωσ）分子量約500
耐熱DNA聚合酶簡介
耐熱DNA 聚合酶(Taq DNA 聚合酶)：1969年人們從美國黃石國家森林公園火山溫泉中分離出一種嗜熱的水生真菌Thermusaquaticus,能在70~ 75C生長,從該菌分離純化得到一種耐熱的、依賴DNA 的DNA 聚合酶,簡稱Taq DNA 聚合酶。 耐熱DNA聚合酶是一種可抗高溫
DNA聚合酶的功能
1）通過核苷酸聚合反應，使DNA鏈沿5’→3’方向延長（DNA聚合酶活性）[1] 2）催化由3’端水解DNA鏈（3’→ 5’核酸外切酶活性，用于切除錯配的堿基）[1] 3）催化由5’端水解DNA鏈（5’→ 3’核酸外切酶活性，用于切除引物）[1] 4）催化由3’端使DNA鏈發生焦磷酸解
DNA聚合酶的特性
DNA聚合酶有多種，E.coli就有三種。通常DNA聚合酶具有以下共同特點：?①需要DNA模板，因此這類酶又稱為依賴DNA的DNA聚合酶；②需要RNA或DNA作為引物(primer)，即DNA聚合酶不能從頭催化；?③催化dNTP加到引物的3'-OH末端，其速率為1000nt/min，因而DN
聚合酶的分類介紹
可分為以下幾個類群:(1)依賴DNA的DNA聚合酶；(2)依賴RNA的DNA聚合酶；(3)依賴DNA的RNA聚合酶；(4)依賴RNA的RNA聚合酶。前兩者是DNA聚合酶，它使DNA復制鏈按模板順序延長。如在原核生物中僅就大腸桿菌中已被發現的就有三種(分別簡稱為PolⅠ，PolⅡ和PolⅢ等)；D
DNA聚合酶的應用
E.coli的DNA pol Ⅰ涉及DNA損傷修復，在半保留復制中起輔助的作用。DNA polⅡ在修復損傷中也具有重要的作用。DNA polⅢ是一種多亞基的蛋白質，在DNA新鏈的從頭合成中起復制酶的作用。復制的忠實性問題會影響到翻譯的精確性，這種忠實性主要依賴于堿基的特異性配對。據估計每個堿基對將有
DNA聚合酶的發現
在50年代的中期，A. Kornberg和他的同事們就想到DNA的復制必然是一種酶的催化作用，于是決心分離出這種酶并研究其結構和作用機制。為了達到這個目的，他們分離的蛋白，然后加到體外合成系統中即 同位素標記的dNTP、Mg2+及模板DNA，經過大量的工作，于1956年終于發現了DNA聚合酶Ⅰ（
聚合酶的基本特性
聚合作用在引物RNA'-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。酶的專一性主要表現為新進入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有催化作用。dNTP進入結合位點后，可能使酶的構象發生變化，促進3'-OH與5
DNA聚合酶及其應用
（一）大腸桿菌DNA聚合酶I是Kornberg A. 1956年首先從大腸桿菌E。Coli 細胞中分離出來的。它是一種多功能性的酶，包括 3種不同的酶活力：5′→ 3′聚合酶活性（模板， 帶3′－OH游離基團的引物、4dNTPs、 Mg2+ ）。雙鏈特異性的5'→3'核酸外切酶活性。
RNA聚合酶的特點
RNA聚合酶催化RNA的合成，其與DNA聚合酶有許多相同的催化特點：①以DNA為模板；②催化核苷酸通過聚合反應合成核酸；③聚合反應是核苷酸形成3’，5’一磷酸二酯鍵的反應；④以3’→5’方向閱讀模板，5’→3’方向合成核酸；⑤按照堿基配對原則忠實轉錄模板序列。
DNA聚合酶的功能
[1] 聚合作用：在引物RNA'-OH末端，以dNTP為底物，按模板DNA上的指令由DNApolⅠ逐個將核苷酸 加上去，就是DNApolⅠ的聚合作用。 酶的專一性主要表現為新進入的脫氧核苷酸必須與模板DNA配對時才有 催化作用。dNTP進入結合位點后，可能使酶的 構象發生變化，促進3&
DNA聚合酶及其應用
（一）大腸桿菌DNA聚合酶I是Kornberg A. 1956年首先從大腸桿菌E。Coli 細胞中分離出來的。它是一種多功能性的酶，包括 3種不同的酶活力：5′→ 3′聚合酶活性（模板， 帶3′－OH游離基團的引物、4dNTPs、 Mg2+ ）。雙鏈特異性的5'→3'核酸外切酶活性。
DNA聚合酶的定義
真核細胞有5種DNA聚合酶，分別為DNA聚合酶α（定位于胞核，參與復制引發，不具有5'－3'外切酶活性及3'－5'外切酶活性，有5'－3'聚合酶活性），β（定位于核內，參與高保真度復制，不具有5'－3'外切酶活性，其中疑似存在5&#
RNA聚合酶的結構
為什么細菌的RNA聚合酶需要這么大和復雜的分子結構呢?而某些噬菌體特有的RNA聚合酶則要小得多，僅由一條多肽鏈組成。這證明RNA合成所需的機構可以遠比宿主的酶小。這種情況說明，噬菌體內的轉錄僅需一條"最小"的機構。然而這種酶只能識別噬菌體本身所有的少數幾個啟動子；它們不能識別其他啟動子。例如噬菌
DNA聚合酶的用途
聚合酶鏈反應(polymerase chain reaction, PCR)。Taq酶擴增的PCR產物，3'末端總是帶有1個非模板依賴型的突出堿基，而這個堿基幾乎總是A，因為Taq酶對dATP具有優先聚合活性，故可用T載體克隆。
反向聚合酶鏈反應
中文名稱反向聚合酶鏈反應英文名稱inverse PCR;iPCR定 義用于擴增已知序列的DNA旁側未知序列的方法。即先用在已知DNA序列上沒有識別位點的限制內切酶，切出包含已知DNA、而兩端帶有未知序列的區段，將切出的DNA區段環化，然后再按已知的DNA序列設計一對引物進行擴增。應用學科細胞生物學
DNA聚合酶的特性
原核生物大腸桿菌DNA聚合酶DNA聚合酶最早在E.coli中發現，到目前為止已確定有5種類型，分別為DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶V，都與DNA鏈的延長有關。?其中DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ研究得比較明確。DNA聚合酶Ⅰ是1956年由Arthur Kombe
關于聚合酶的介紹
1957年，美國科學家阿瑟·科恩伯格（Arthur Kornberg）首次在大腸桿菌中發現DNA聚合酶，這種酶被稱為DNA聚合酶I（DNA polymerase I，簡稱：Pol I）。1970年，德國科學家羅爾夫·克尼佩爾斯（Rolf Knippers）發現DNA聚合酶II（Pol II）。隨
DNA聚合酶的概述
DNA聚合酶（DNA polymerase）是 細胞復制DNA的重要作用酶。DNA聚合酶 , 以DNA為復制模板，從將DNA由5'端點開始復制到3'端的酶。DNA聚合酶的主要活性是催化DNA的合成（在具備模板、 引物、dNTP 等的情況下）及其相輔的活性。 真核細胞有5種DNA
RNA聚合酶的作用
RNA聚合酶（RNA polymerase）的作用是轉錄RNA。有的RNA聚合酶有比較復雜的亞基結構。如大腸桿菌RNA聚合酶有四條多肽鏈，另有一個促進新RNA分子合成的σ因子，因此它的組成的是α2ββσ。這種結構稱為全酶（holoenzyme），除去了σ因子的酶稱為核心酶。噬菌體RNA聚合酶則沒
DNA聚合酶的缺點
缺點無3'→5'閱讀校正功能，在PCR擴增過程可引起錯配，30次循環錯配率約0.25%。措施:選擇高保真Taq酶，如Pfu。原因:Pfu具有3'→5'外切酶活性。注意:Pfu擴增產物為平末端。
RNA聚合酶的分類
通常可根據生物的類別，將RNA聚合酶分為原核生物RNA聚合酶、真核生物RNA聚合酶。原核生物和真核生物的RNA聚合酶有共同特點，但在結構、組成和性質等方面又不盡相同。（1）原核生物RNA聚合酶 研究得最清楚的是大腸桿菌RNA聚合酶。該酶是由五種亞基組成的六聚體（α2ββ'ωσ）分子量約500
DNA聚合酶的種類
原核生物大腸桿菌DNA聚合酶DNA聚合酶最早在E.coli中發現，到目前為止已確定有5種類型，分別為DNA聚合酶Ⅰ、DNA聚合酶Ⅱ、DNA聚合酶Ⅲ、DNA聚合酶Ⅳ和DNA聚合酶V，都與DNA鏈的延長有關。其中DNA聚合酶I、Ⅱ、Ⅲ研究得比較明確。?DNA聚合酶Ⅰ是1956年由Arthur Kombe