ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
抗體的活性和純度對制備標記抗體至關重要,因為特異性免疫反應隨抗體活性和純度的增加而增強。 在酶標記過程中,抗體的活性有所降低,故需要純度高、效價高及抗原親和力強的抗體球蛋白,最好使用親和層析提純的抗體,可提高敏感性,而且可稀釋使用,減少非特異性吸附。 酶與抗體交聯,常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行,標記效果好,特別適用于實驗室的小批量制備。 其標記程序為:將5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中,加入新鮮配制的0.06 mol/L的過碘酸鈉(NaIO4)水溶液0.5ml,混勻置4℃冰箱30分鐘 , 取出加入0.16mol/L的乙二醇水溶液0.5ml,室溫放置30分鐘后加入含5g純化抗體的水溶液1ml,混勻并裝透析袋,以0.05mol/L、pH9.5的碳酸鹽緩沖液于4℃冰箱中慢慢攪拌透析6小時(或過夜)使之結合,然后吸出,加硼氫化鈉(N......閱讀全文
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
1、直接ELISA試劑盒本法首要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,直接ELISA的操作程序如下:(1) 資料① 包被液、洗刷液、保溫液、底物液、停止液;② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參閱血清;待檢鴨血清;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。(2)
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) :是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原,
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) :是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者用于檢測大分子抗原
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
? 抗體的活性和純度對制備標記抗體至關重要,因為特異性免疫反應隨抗體活性和純度的增加而增強。? 在酶標記過程中,抗體的活性有所降低,故需要純度高、效價高及抗原親和力強的抗體球蛋白,最好使用親和層析提純的抗體,可提高敏感性,而且可稀釋使用,減少非特異性吸附。? 酶與抗體交聯,常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序
根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型:一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA,即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點ELISA(Dot-ELISA);再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA,稱為布ELISA(C-ELISA)。
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序(一)
??? 酶聯免疫吸附試驗 (以下簡稱ELISA) :是酶免疫測定技術中應用最廣的技術。其基本方法是將已知的抗原或抗體吸附在固相載體 ( 聚苯乙烯微量反應板 ) 表面,使酶標記的抗原-抗體反應在固相表面進行,用洗滌法將液相中的游離成分洗除。常用的 ELISA 法有雙抗體夾心法和間接法,前者
ELISA方法的基本類型、用途及操作程序(二)
4、競爭ELISA ??? 此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為:① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液④ 用ELISA檢
酶聯免疫吸附試驗方法的基本類型、用途及操作程序
? 根據ELISA所用的固相載體而區分為三大類型:一是采用聚苯乙烯微量板為載體的ELISA,即我們通常所指的ELISA(微量板ELISA);另一類是用硝酸纖維膜為載體的ELISA,稱為斑點ELISA(Dot-ELISA);再一類是采用疏水性聚脂布作為載體的ELISA,稱為布ELISA(C-ELISA
阻斷ELISA的操作程序
本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬病(PR)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序:① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃
間接ELISA的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下: ⑴ 材料 ① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液; ② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清; ③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。 ⑵ 方
ELISA檢測類型方法比較
進口elisa試劑盒可分有多種檢測類型,是種廣泛應用在測定液體樣本中的蛋白、抗體、或激素的免疫分析技術。今日,我司為您講解幾種ELISA檢測類型的優缺點比較,以供各位參考:一、直接法(direct ELISA)? ? 將抗原直接固定在固相載體上,加入酶標記的一級抗體,即可測定抗原總量,此一級抗體的特
競爭ELISA法的操作程序
此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為:① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液④ 用ELISA檢測儀測定OD值。被結合的酶標
布ELISA法的操作程序
(C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即滌綸布為固相載體,這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大,可為免疫反應提供較大的表面
斑點ELISA法的操作程序
常規的微量板ELISA比較,Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點,而且結果可長期保存;但其也有不足,主要是在結果判定上比較主觀,特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為:⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中,置
布ELISA法的操作程序
(C-ELISA) C-ELISA(Cloth-ELISA)是加拿大學者Blais,B. W.等于1989年建立的一種新型免疫檢測技術。該方法是以疏水性聚脂布(Hydrophobic Polyester Cloth)即滌綸布為固相載體,這種大孔徑的的疏水布具有吸附樣品量大,可為免疫反應提供較大的表面
間接ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4
間接ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測抗體。以鴨病毒性肝炎(DVH)抗體的ELISA為例,間接ELISA的操作程序如下。⑴ 材料① 包被液、洗滌液、保溫液、底物液、終止液;② DVH包被抗原、酶標抗抗體、陰性及陽性DVH參考血清;待檢鴨血清;③ ELISA檢測儀、加樣器、聚苯乙烯微量板。⑵ 方法步驟① 加抗原包被 → 4
斑點ELISA法的操作程序
與常規的微量板ELISA比較,Dot-ELISA具有簡便、節省抗原等優點,而且結果可長期保存;但其也有不足,主要是在結果判定上比較主觀,特異性不夠高等。該方法的主要操作程序為:⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中,
阻斷ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測型特異性抗體。該方法現已成為豬傳染性胃腸炎(TGE)、豬偽狂犬病(PR)及豬胸膜肺炎(AP)的主要檢測方法。下面以AP2型抗體的阻斷ELISA檢測法為例介紹其操作程序:① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃
競爭ELISA法的操作程序
此法主要用于測定小分子抗原及半抗原,其原理類似于放射免疫測定。其基本程序為:① 抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加入待檢抗原及一定量的酶標抗原(對照孔僅加酶標抗原)→ 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加底物液 → 37℃ 20分鐘,加終止液④ 用ELISA檢測儀測定OD值。被結合的酶標
抗體捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現于感染早期,所以檢測出IgM,則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種,其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性,該方法的主要程序為:① 用抗u鏈(抗IgM重鏈)抗體包被→
雙夾心ELISA法的操作程序
此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于:它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原,它不僅不必標記每一種抗體,還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為:① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產的特異性抗體(A
抗體捕捉ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測IgM抗體。由于IgM抗體出現于感染早期,所以檢測出IgM,則可作為某種疾病的早期診斷。抗體捕捉ELISA根據所用標記方式不同可分為標記抗原、標記抗體、標記抗抗體捕捉ELISA等幾種,其中以標記抗原捕捉ELISA比較有代表性,該方法的主要程序為:① 用抗u鏈(抗IgM重鏈)抗體包被→
雙夾心ELISA法的操作程序
此法與雙抗體夾心ELISA的主要區別在于:它是采用酶標抗抗體檢查多種大分子抗原,它不僅不必標記每一種抗體,還可提高試驗的敏感性。此法的基本程序為:① 加抗體(Ab-1)包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢抗原(Ag) → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加用非同種動物生產的特異性抗體(A
阻斷ELISA檢測法操作程序
① 100μl AP2型工作量抗原包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 用200μl阻斷緩沖液進行封閉 → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干③ 加工作量1:4稀釋被檢豬血清100μl → 37℃ 60分鐘,洗滌三次、拋干④ 加100μl工作量兔抗AP2型血清 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干⑤
斑點ELISA法主要操作程序
⑴載體膜的預處理及抗原包被 取硝酸纖維素膜用蒸餾水浸泡后,稍加干燥進行壓圈。將陰性、陽性抗原及被檢測抗原適度稀釋后加入圈中,置37℃使硝酸纖維素膜徹底干燥。每張7cm×2.3cm的膜一般可點加40-53個樣品,每個壓圈可加抗原液1-20μl。⑵ 封閉 將硝酸纖維素膜置于封閉液中,37℃感作15-30
脫模劑的特點及類型用途
特點 ①脫模性(潤滑性)。形成均勻薄膜且形狀復雜的成形物時,尺寸精確無誤。 ②脫模持續性好。 ③成形物外觀表面光滑美觀,不因涂刷發粘的脫模劑而招致灰塵的粘著。 ④二次加工性優越。當脫模劑轉移到成形物時,對電鍍、熱壓模、印刷、涂飾、粘合等加工物均無不良影響。 ⑤易涂布性。 ⑥耐熱性。
滾筒烘干機的類型及用途
類型 滾筒式烘干機主要包括三種形式:單回程 烘干機、雙回程烘干機和三回程烘干機。其中三回程烘干機以占地面小,能耗低最具優勢。 用途 高效組合式 三筒烘干機主要用于烘干一定濕度范圍內顆粒物料,如干粉砂漿行業所用的黃砂、鑄造行業用的各種規格型砂。建材水泥行業用的高爐礦渣。小粒度粘土,化工行業用
雙抗體夾心ELISA法的操作程序
本法主要用于檢測大分子抗原。現以檢測雞傳染性法氏囊病病毒(IBDV)的雙夾心抗體ELISA為例介紹本法的操作程序。① 加抗體包被 → 4℃過夜,洗滌三次、拋干② 加待檢抗原 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干③ 加酶標抗體 → 37℃ 30分鐘,洗滌三次、拋干④ 加底物液 → 37℃ 15分鐘,加
紫脲酸銨的基本用途及生產方法
用途絡合指標劑,用于鈣、鈷、銅、錳、鎳、鈧、鋅等的測定。用途用作測定鈣、鈷、銅、錳、鎳、鈧、鋅等的絡合指示劑。生產方法將10g三氧化鉻、4g水和40g冰乙酸加熱溶解,冷卻至30℃,分批慢慢加入16g巴妥酸,控制Chemicalbook反應溫度45-50℃。加畢,在50℃保溫半小時,放置過夜,加入10