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  • 用Percoll不連續密度梯度法分離小鼠精原細胞的方法介紹

    目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布于位于27%~35%間的Percoll梯度中,其超微結構與7~8d小鼠睪丸切片內精原細胞的超微結構一致,經純化后其純度達68.76%。 結論 用組合酶消化、Percoll不連續密度梯度法分離的7~8d小鼠的精原細胞能滿足體外培養的需要。......閱讀全文

    用Percoll不連續密度梯度法分離小鼠精原細胞的方法介紹

    目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布于位于27

    用Percoll不連續密度梯度法分離小鼠精原細胞的方法詳解

    精原細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、運動、衰老、死亡等項生命活動的調節機制的深入研究,精子發生機理的進一步闡明以及精原細胞異體、異種移植技術的實際應用,都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化,以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞,用于體外培養。資料表明,從成年嚙齒類的睪丸分離粗線期及其后

    小鼠精原細胞的分離和純化

    【摘要】 目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布

    小鼠精原細胞的分離和純化

    【摘要】 目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布

    小鼠精原細胞的分離和純化

    【摘要】 目的 探討小鼠精原細胞的分離純化。 方法 用組合酶消化法制備7~8d小鼠的生殖細胞懸液;用Percoll不連續密度梯度法分離精原細胞。 結果 所獲細胞懸液內活細胞、死細胞及細胞團的百分比分別為90.08%、9.92%及8.91%;平均每個睪丸可獲得4.136×105個細胞;精原細胞主要分布

    Percoll非連續性密度梯度離心法單核細胞的分離實驗

    基本原理:本文分離單核細胞所用方法是Percoll非連續性密度梯度離心法,主要是根據不同細胞間密度的差別進行細胞分離。此法易操作,且使用通常的實驗設備即可完成。試劑與器材·外周血單個核細胞·PBS 1×和PBS 10×(無Ca2+、Mg2+),含0.5mM EDTA·胎牛血清(56℃,30分鐘加熱滅

    小鼠精原細胞的分離和純化

    實驗概要精原細胞的生理生化特性及其分裂增殖、分化、運動、衰老、死亡等項生命活動的調節機制的深入研究,精子發生機理的進一步闡明以及精原細胞異體、異種移植技術的實際應用,都迫切需要找到一種可行的方法將其分離純化,以期得到較高產量和純度的有活力的精原細胞,用于體外培養。資料表明,從成年嚙齒類的睪丸分離粗線

    不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞

    (一) 原理  Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(

    單個核細胞的分離

    實驗概要外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)主要指淋巴細胞和單核細胞,是免疫學實驗最常用的細胞,也是進行T細胞和B細胞分離純化的重要環節。本實驗介紹了兩種單個核細胞的分離方法。實驗原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密

    單個核細胞的分離純化

    外周血單個核細胞(peripheral blood mononuclear cell,PBMC)主要指淋巴細胞和單核細胞,是免疫學實驗最常用的細胞,也是進行T細胞和B細胞分離純化的重要環節。1.原理PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密度較大,為1.092左右;淋巴細胞和單核細胞的

    染色體分離實驗——Percoll梯度法

    實驗材料染色質試劑、試劑盒精胺精咪Percoll 溶液儀器、耗材聚碳酸酯離心管實驗步驟1. 在體積為 10 ml 分離得到的染色質物質中加入精胺和精咪至終濃度分別為 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液,勻漿分離得到的染色質。Percoll 溶液:

    線粒體分離實驗—用蔗糖密度梯度法純化線粒體

    實驗材料線粒體懸液試劑、試劑盒蔗糖溶液Tris-HClEDTA儀器、耗材Bockman SW28 號轉頭實驗步驟1. 在用于 Bockman SW28 號轉頭(或與其等同的產品)的 Uitradear 離心管中,小心地在 15 ml 1.5 mol/L 的蔗糖溶液上加一層 15 ml 1.5 mol

    用-CsCl,Percoll,-Nycodenz,-metrizamide作自形成密度梯度離心-二

    四)碘鹽自形成梯度:( Nycodenz或 metrizamide) ??這二種梯度材料在固定角式轉頭或垂直管轉頭,近垂直轉頭離心過程中會用較短的時間就可以自形成密度。??和重金屬鹽一樣,離心力、轉頭種類、離心時間對自形成梯度的形狀都有很大的影響。??由于碘鹽的粘性系數對溫度很敏感,很小的溫升也會因

    用-CsCl,Percoll,-Nycodenz,-metrizamide作自形成密度梯度離心-三

    表(三)metrizamide及其溶液的性質(20℃)濃度密度g/ml折射率粘性滲透率百分比濃度%(W/V)Molar00.0000.99821.33301.00100.1271.05121.34831.3107200.2531.10621.36461.6180300.3801.16121.3809

    用-CsCl,Percoll,-Nycodenz,-metrizamide作自形成密度梯度離心-一

    用 CsCl,Percoll, Nycodenz, metrizamide作自形成密度梯度離心一)概述:近年來用重金屬鹽(主要是 CsCl)分離生物大分子的平衡等密度離心;用 Percoll(由瑞典 pharmacia-Biosystems AB開發的膠體硅材料,即在硅顆粒外包覆 PVP塑料

    Percoll細胞分離液的使用方法

    實驗概要掌握Percoll細胞分離液的使用方法。實驗原理Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(

    細胞分離純化技術

    Percoll不連續密度梯度沉淀法分離純化淋巴細胞和淋巴母細胞實驗方法原理Percoll是一種包有乙烯吡咯烷酮的硅膠顆粒。滲透壓很低(

    密度梯度細胞分離法

    ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備密度梯度液,通過密度梯度液離心細胞,收集各梯度組分,用培養基稀釋,培養細胞。 實驗材料 細胞樣品

    密度梯度細胞分離法

    實驗方法原理制備密度梯度液,通過密度梯度液離心細胞,收集各梯度組分,用培養基稀釋,培養細胞。實驗材料細胞樣品試劑、試劑盒D-PBS0.25%胰蛋白酶儀器、耗材生長培養基生長培養基+20% Percoll25ml離心管注射器或梯度收集器24孔培養板折光儀或密度計低速離心機實驗步驟通過下述方法之一制備密

    密度梯度細胞分離法

    實驗方法原理 制備密度梯度液,通過密度梯度液離心細胞,收集各梯度組分,用培養基稀釋,培養細胞。實驗材料 D-PBS0.25%胰蛋白酶儀器、耗材 生長培養基生長培養基+20% Percoll25ml離心管注射器或梯度收集器24孔培養板折光儀或密度計低速離心機實驗步驟 通過下述方法之一制備密度梯度液:(

    密度梯度細胞分離法

    ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 制備密度梯度液,通過密度梯度液離心細胞,收集各梯度組分,用培養基稀釋,培養細胞。 實驗材料 細胞樣品

    用高速固定角轉頭不連續蔗糖梯度分離細胞器

    在例(十)中已介紹了用日立CR22G/21G離心機R18A轉頭,日立50ml錐底組織培養管分離質膜的方法。下面介紹用一般的圓底離心管(瓶),不連續(階梯)蔗糖梯度,在高速離心機上分離質膜、內質網、溶酶體、線粒體、過氧化酶體的方法。設備:●主機Hitachi,CR21GⅡ(或21G)高速冷凍離心機●轉

    核細胞分離的原理及分層液法的分離步驟

      單個核細胞PBMC的密度與血液中的其他成分不同。紅細胞和粒細胞的密度較大,為1.092左右;淋巴細胞和單核細胞的密度為1.076~1.090;血小板為1.030~1.035。因此,利用一種密度介于1.076~1.090之間、近于等滲的溶液(分層液)進行密度梯度離心,可使不同類別的血細胞按其相應密

    密度梯度分離法分離單個核細胞(MNCs)

    試劑和材料:1. 合適的培養基或冷凍液;2. PBSA;3. Ficoll-Hypague;4. 巴氏吸管;5. 50ml離心管;實驗方法:1. 將臍血樣品用PBSA按1:1比例稀釋;2. 將15ml Ficoll-Hypague吸入50ml離心管;3. 將30mlPBSA稀釋的臍血樣品緩慢地加到F

    Percoll梯度法染色實驗

    實驗材料:染色質試劑、試劑盒:精胺、精咪、Percoll、溶液儀器、耗材:聚碳酸酯離心管實驗步驟:1. 在體積為 10 ml 分離得到的染色質物質中加入精胺和精咪至終濃度分別為 0.8 mmol/L 和 2 mmol/L。2. 加入 10 ml Percoll 溶液,勻漿分離得到的染色質。Perco

    小鼠ES細胞的分離方法的介紹

      小鼠ES細胞的分離方法基本成熟,且已廣泛應用于生命科學研究的各個領域。1981年Evans首次分離得到小鼠ES細胞,他以手術切除受精后2.5d小鼠卵巢并結合激素注射干擾子宮環境,從而使胚胎延遲著床,再回收胚胎,將其體外培養于STO細胞飼養層上,結果得到了小鼠ES細胞系。MartinGR以免疫外科

    血細胞的分離方法1

    血細胞由紅細胞,白細胞,血小板等組成.實驗中常用白細胞來做研究,如炎癥滲出,細胞遷移,識別等都涉及到白細胞.白細胞又分為:粒細胞,淋巴細胞,單核細胞等.它們具有不同的功能.實驗中常需要分離血細胞方能進行。這里主要論述人外周白細胞的分離,主要是中性粒細胞(Neutrophil),淋巴細胞(Lympho

    外周血中嗜堿性粒細胞(BASO)分離方法

    Percoll密度梯度離心分離法:1、Pcrcoll混懸液的配制:Percoll 90ml,HBSS 9ml, HEPES(0.25mol/l)1ml(PH 7.3),HCL(1mol/l)0.4ml 調節至PH7.42、制備Percoll密度梯度管密度 Percoll/HBSS(ml/ml)1.0

    不連續Nycodenz梯度溶液中原代細胞溶酶體的分離

    試劑和器材:?1.勻漿介質:0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;2.NycoprepTM Universal;3.磷酸緩沖液pH7.4(50mmol/L)4.NycoprepTM Universal稀釋劑:6mmol/L乙二胺四

    不連續Nycodenz梯度溶液中原代細胞溶酶體的分離

    不連續Nycodenz梯度溶液中原代細胞溶酶體的分離試劑和器材:1.勻漿介質:0.25mol/L蔗糖溶液、1mmol/L乙二胺四乙酸、10mmol/L Hepes-NaOH,pH7.4;2.NycoprepTM Universal;3.磷酸緩沖液pH7.4(50mmol/L)4.NycoprepTM

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