熒光定量PCR技術的應用
1、絕對定量分析 這是熒光定量PCR技術的直接應用,可用于檢測病毒及細菌的濃度! 2、相對定量分析及實驗方案 基因表達(gene expression)是指細胞在生命過程中,把儲存在DNA順序中遺傳信息經過轉錄和翻譯,轉變成具有生物活性的蛋白質分子. 遺傳物質DNA首先要把所攜帶的遺傳信息轉錄成為信使RNA(mRNA),攜帶遺傳信息的mRNA從細胞核進入到細胞質中與核糖體結合,在核糖體中mRNA攜帶的遺傳信息被翻譯成為多肽,多肽經過進一步加工后變成蛋白質,至此遺傳物質DNA完成了表達過程。期間的轉錄過程是基因表達中非常重要的調節步驟,所轉錄的mRNA的多少直接影響著相關最終蛋白質的多少,所以通過對細胞內某條基因mRNA含量多少的分析,就能大致判斷出該條基因的表達是否活躍。 &......閱讀全文
熒光定量PCR技術的應用
? ? 1、絕對定量分析? ? 這是熒光定量PCR技術的直接應用,可用于檢測病毒及細菌的濃度!? ??? ? 2、相對定量分析及實驗方案? ? 基因表達(gene expression)是指細胞在生命過程中,把儲存在DNA順序中遺傳信息經過轉錄和翻譯,轉變成具有生物活性的蛋白質分子. 遺傳物質DNA
實時熒光定量PCR技術的應用
1. 基因工程研究領域 ① 基因表達研究:對β地中海貧血癥患者β與γ珠蛋白mRNA水平進行檢測,其結果特異性強、定量準確,為了解β地中海貧血的分子病理機制及其臨床診斷提供了可靠的檢測數據。 ② 轉基因研究:利用兩種發光探針及適當的循環閾值,擴增一個轉移后的基因和一個對照基因,以分析轉基因
熒光PCR/實時定量PCR技術應用簡介
一.熒光PCR原理1.熒光共振能量傳遞?(FRET)某熒光標記基團在激發光刺激下生成某波長的發射光,當另一屏蔽基團與其距離合適時,原發射光將會被屏蔽基團所吸收,并轉化為其他波長的發射光或熱能,稱之為FRET。2.熒光化學:熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種:熒光探針和熒光染料。PCR擴增時在加
熒光定量PCR技術的熒光定量PCR的方法
接下來我們就來了解一下熒光定量的主要方法,我們如何選擇合適的方法?熒光定量PCR所使用的熒光化學可分為兩種:熒光探針和熒光染料。而熒光定量 PCR 的方法相應的可分為特異類和非特異類兩類,特異性檢測方法是在PCR反應中利用標記熒光染料的基因特異寡核苷酸探針來檢測產物;而非特異性檢測方法是在在PCR反
熒光定量PCR技術及其應用(二)
3 應用由于FQ-PCR具有高靈敏性,高特異性和高精確性的特點,目前,該項技術已被應用于病原體測定、腫瘤基因檢測、免疫分析、基因表達、突變及其多態性的研究等多個領域。3.1 病原體測定由于PCR技術的問世,使得病原體檢測能夠快速而方便的進行。但由于其高靈敏性,實驗操作很容易受到污染而出現假陽性。只要
熒光定量PCR技術及其應用(一)
熒光定量PCR(也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR)是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術,該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的,與變通PCR相比,FQ-PCR具有許多優點。本文擬就該技術的特點、原理和方法以及應用作一簡
熒光定量PCR技術及其應用(一)
熒光定量PCR(也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR)是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術,該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的,與變通PCR相比,FQ-PCR具有許多優點。本文擬就該技術的特點、原理和方法以及應用作一簡
熒光定量PCR技術的的應用范圍
熒光定量PCR的應用范圍有哪些,自從熒光定量PCR被發明以后,其應用對生物科學發展所起的作用非常重要,熒光定量PCR的應用的應用大概有下面的這些領域。? ? 1、核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 轉基因動植物基因拷貝數的檢
熒光定量PCR技術
熒光定量pcr(也稱taqmanpcr,以下簡稱fq-pcr)是美國pe(perkinelmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術,該技術是在常規pcr基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的,與變通pcr相比,fq-pcr具有許多優點。
pcr技術應用論文:熒光定量PCR技術在腫瘤研究中的應用
陳文學 鄒學森 陳岳青 黃秀珍 鐘禮瀑?(江西省腫瘤醫院 腫瘤研究所, 江西 南昌 330029)?[摘要] 熒光定量PCR技術具有簡便、靈敏、準確等優點,目前已經在乙肝和性病的診斷和治療中得到了廣泛的應用,但在腫瘤方面的應用還處在研究和開發階段。本文綜述近年國內外相關熒光定量PCR技術在腫瘤研究中
實時熒光定量-PCR技術原理與應用
聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析,分析的都是 PCR 終產物。但是在許多情況下,我們所感興趣的是未經 PCR
實時熒光定量-PCR技術原理與應用
聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析,分析的都是 PCR 終產物。但是在許多情況下,我們所感興趣的是未經
熒光定量PCR儀的應用
熒光定量PCR儀可用于醫療,新藥研發,診斷檢驗試劑研發等領域。?在醫療方面,具體可用于病原體檢測;產前診斷以防止各類遺傳性疾病的發生;藥物療效考核,例如對乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關系;腫瘤基因檢測。?在新藥開發研究中,實時熒光定量PCR
熒光定量PCR儀的應用
?熒光定量PCR儀可用于醫療,新藥研發,診斷檢驗試劑研發等領域。?在醫療方面,具體可用于病原體檢測;產前診斷以防止各類遺傳性疾病的發生;藥物療效考核,例如對乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV) 定量分析顯示:病毒量與某些藥物的療效關系;腫瘤基因檢測。?在新藥開發研究中,實時熒光定量PC
熒光定量PCR的相關應用
臨床疾病診斷 各型肝炎、艾滋病、禽流感、結核、性病等傳染病診斷和療效評價;地中海貧血、血友病、性別發育異常、智力低下綜合癥、胎兒畸形等優生優育檢測;腫瘤標志物及瘤基因檢測實現腫瘤病診斷;遺傳基因檢測實現遺傳病診斷。 動物疾病檢測 禽流感、新城疫、口蹄疫、豬瘟、沙門菌、大腸埃希菌、胸膜肺炎放
熒光定量PCR的應用范圍
1.核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 轉基因動植物基因拷貝數的檢測,RNAi 基因失活率的檢測等。?2.基因表達差異分析。 比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異 ( 如藥物處理、物理處理、化學處理等 ) ,特定基因在
熒光定量PCR技術簡介
國內最先進的熒光定量PCR檢測系統,是國際上最新研制的一種核酸定量技術,該技術在PCR反應系統中引入了熒光標記探針,具有高靈敏性、高特異性、和高精確性的特點。目前已被應用于病原體測定、腫瘤基因檢測、免疫分析、基因表達、突變和多態性研究等多個領域。熒光定量PCR(簡稱FQ-PCR)由美國PE公司199
實時熒光定量PCR技術
通過實時熒光定量PCR技術實現對miRNA靶向物mRNAs的相對定量分析1 導言小RNA(miRNAs)是一種內源性非編碼蛋白的小分子RNA,它們是許多基礎的細胞過程中基因表達的主要調節因子,這些過程包括細胞增殖、細胞分化以及細胞凋亡等。miRNA在腫瘤生長過程中也發揮著重要作用。一般來說,miRN
熒光定量PCR技術原理
將標記有熒光素的Taqman探針與模板DNA混合后,完成高溫變性,低溫復性,適溫延伸的熱循環,并遵守聚合酶鏈反應規律,與模板DNA互補配對的Taqman探針被切斷,熒光素游離于反應體系中,在特定光激發下發出熒光,隨著循環次數的增加,被擴增的目的基因片段呈指數規律增長,通過實時檢測與之對應的隨擴增
時熒光定量PCR技術
?? 時熒光定量PCR技術即是在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號實時監測整個PCR進程,zui后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。實時熒光定量PCR避免了傳統PCR以終產物檢測定量產生的偏差,提高實驗的重復性。該技術已被廣泛用于檢測細胞mRNA表達量的變化;比較不同組織的 mRNA
實時熒光定量-PCR技術原理與應用(二)
SYBR Green I 在核酸的實時檢測方面有很多優點,由于它與所有的雙鏈 DNA 相結合,不必因為模板不同而特別定制,因此設計的程序通用性好,且價格相對較低。利用熒光染料可以指示雙鏈 DNA 熔點的性質,通過熔點曲線分析可以識別擴增產物和引物二聚體,因而可以、區分非特異擴增,進一步地還可
實時熒光定量-PCR技術原理與應用(一)
實時熒光定量 PCR技術原理與應用聚合酶鏈式反應 ( PCR) 可對特定核苷酸片斷進行指數級的擴增 。在擴增反應結束之后,我們可以通過凝膠電泳的方法對擴增產物進行定性的分析,也可以通過 放射性核素摻入標記后的光密度掃描來進行定量的分析 。無論定性還是定量分析,分析的都是 PCR 終產物。但是
熒光定量PCR技術特點、原理及其應用2
3 應用由于FQ-PCR具有高靈敏性,高特異性和高精確性的特點,目前,該項技術已被應用于病原體測定、腫瘤基因檢測、免疫分析、基因表達、突變及其多態性的研究等多個領域。3.1 病原體測定由于PCR技術的問世,使得病原體檢測能夠快速而方便的進行。但由于其高靈敏性,實驗操作很容易受到污染而出現假陽性。只要
熒光定量PCR技術特點、原理及其應用1
熒光定量PCR(也稱TaqMan PCR,以下簡稱FQ-PCR)是美國PE(Perkin Elmer)公司1995年研制出來的一種新的核酸定量技術,該技術是在常規PCR基礎上加入熒光標記探針來實現其定量功能的,與變通PCR相比,FQ- PCR具有許多優點。本文擬就該技術的特點、原理和方法以及
熒光定量PCR技術特點、原理及其應用3
3.2腫瘤研究意大利Gelmini等[2]用FQ-PCR技術檢測乳腺癌標本c-erbB-2基因拷貝數目變異情況。他們以β-肌動蛋白基因為參照探索最佳實驗條件,當擴增循環數在28~31之間時,△RQ與模板DNA有著較好的劑量依賴關系。他們在此條件下擴增了c-erbB-2基因和β-球蛋白基因,發現△RQ
熒光定量PCR技術的原理
所謂實時熒光定量PCR技術,是指在PCR反應體系中加入熒光基團,利用熒光信號積累實時監測整個PCR進程,最后通過標準曲線對未知模板進行定量分析的方法。
熒光定量PCR:簡介,原理,應用
熒光定量PCR簡介 熒光定量PCR檢測技術誕生至今已10多年的時間,而其應用一直都沒廣泛展開,究其原因,無外乎受制于相關儀器、試劑和技術的發展。近期,尤其是08年以來,儀器和試劑是遍地開花,這也使科研人員均躍躍欲試,都想借此技術使自己的研究能突飛猛進,發展勢頭通過查找每年所發表的文章數可一目了然。據
熒光定量PCR應用——腫瘤篇
?? 腫瘤是是機體在各種致癌因素作用下,局部組織細胞在基因水平上失去對其生長的正常調控,從而導致其克隆性異常增生而形成的異常病變。學界將其分為良性和惡性兩大類。腫瘤作為全球疾病致死的重要元兇之一,如果發現和治療不及時,有可能導致人體消瘦、無力、貧血、食欲不振、發熱及臟器功能受損等,其后果極為嚴重。?
熒光定量PCR應用——病毒篇
諾如病毒諾如病毒(Norovirus,NVs)屬于杯狀病毒科諾如病毒屬,是引起非細菌性急性胃腸炎的主要病原體,世界50%以上的胃腸炎暴發均由它引起,可在醫院、學校、餐館等人群密集地爆發急性胃腸炎。根據病毒RNA 聚合酶和衣殼蛋白核苷酸序列的差異,諾如病毒分為5個基因型,其中GI、GII 型諾如病
熒光定量PCR:簡介、原理、應用
熒光定量PCR的應用分子生物學研究1、核酸定量分析。 對傳染性疾病進行定量定性分析,病原微生物或病毒含量的檢測 , 比如近期流行的甲型H1N1流感, 轉基因動植物基因拷貝數的檢測,RNAi 基因失活率的檢測等。2 、基因表達差異分析。 比較經過不同處理樣本之間特定基因的表達差異 ( 如藥物處理、物理