酶標抗體標記效果測定
酶標抗體標記效果測定：測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結合率。......閱讀全文
酶標抗體標記效果測定
酶標抗體標記效果測定：測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結合率。
酶標記抗體
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量的酶(
改良過碘酸鈉標記法制備酶標抗體
HRP分子中與酶活性無關的糖基被過碘酸鈉氧化為醛基，再與抗體蛋白的氨基形成Schiff堿。為了防止酶蛋白的氨基與醛基發生自身偶聯，在標記前先用2，4-二硝基氟苯(DNFB)封閉酶蛋白中殘留的a-和e-氨基。酶與抗體的結合反應后，再加入硼氫化鈉還原成穩定的結合物。 (1) 取HRP 5mg溶
抗體捕獲酶標抗體法測定抗體的介紹
抗體捕獲酶標抗體法測定抗體，血清中針對某些抗原的特異性IgM常和特異性IgG同時存在，后者會干擾IgM抗體的測定。因此測定IgM抗體多用捕獲法。先將所有血清IgM（包括異性IgM和非特異性IgM）固定在固相上，去除IgG后再測定特異性IgM。將抗IgM抗體連接在固相載體上，洗滌后加入稀釋的血清標
原裝進口酶標各種熒光標記抗地高辛抗體
地高辛（Digoxin）是一種從洋地黃提取出的beta抑制劑性的藥物，被廣泛用于治療高血壓、瓣膜性心臟病、先天性心臟病等急性和慢性心功能不全的一種藥物。由于地高辛的治療指數狹窄，用藥過量與用藥不足時的癥狀相似，加之其個體差異大，故中毒的發生率高，是臨床上最難掌握藥物之一。目前解除地高辛毒性的最有效的
競爭酶標抗體法測定抗體的基本介紹
競爭酶標抗體法測定抗體，可用于測定抗原，也可用于測定抗體。以測定抗原為例，受檢抗原和酶標抗原競爭與固相抗體結合，因此結合于固相的酶標抗原量與受檢抗原的量呈反比。將特異抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌后加入受檢標本和一定量酶標抗原的混合溶液，使之與固相抗體反應。如受檢標本中無抗原，則酶標抗原
酶標記抗體技術方法
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量
酶標記抗體的概述
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。高質量的酶(如
酶標記抗體技術方法
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量
簡述堿性磷酸酶標抗體制備技術的標記步驟
（1）取抗體（2～5mg/mL）1mL，加入AP 5mg溶解。 （2）裝入透析袋，用0.01mol/L、Ph7.2PBS4℃透析18h，換液3次。 （3）加入2.5%戊二醛20uL，室溫（20℃±）放置2h。4℃0.01mol/L、pH7.2PBS透析過夜，換液3次。 （4）移
酶標抗體制備技術戊二醛交聯法的標記步驟
（1）取10mgHRP溶于0.2 mL1.25%戊二醛(用0.01mol/L、pH6.8PB將25%戊二醛稀釋為1.25%)，室溫（20℃左右）反應結合18h。 （2）用0.15mol/LNaCl平衡過的Sephadex G-50凝膠柱洗脫，除去游離的戊二醛，或用0.01mol/L，pH7.2
熒光素標記試劑與酶標試劑
(1)酶標試劑：酶標抗體僅需適當底物和普通光學顯微鏡即可高度敏感地檢出抗原。由于信號是通過吸收光的差異，而非發射光來檢測，底物的不溶性顯色產物分布在酶所在位置的周圍區域，因此這種檢測方法尚不能達到熒光技術的分辨率。 酶反應后出現沉淀，在酶所處位置周圍產生不溶性顯色產物，通過底物的顯色來檢出
酶標記抗體技術方法（一）
? 酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質
酶標記抗體技術方法（三）
3. 結果判定： 除標記物IgG量的計算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。 IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62 4. 試劑及器材: (1) 0.1M NaIO４：稱取241mg高碘酸鈉(廣州化學試劑廠，批號830602)溶于蒸餾水10ml中。 (2
酶標記抗體技術方法（二）
三、HRP標記抗體的方法 酶與抗體交聯的方法有許多種,根據酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。 戊二醛二步法 1. 原理：戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
酶免疫技術抗體的酶標記方法
用于酶免疫技術的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。目前酶免疫技術檢測中常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。由于辣根過氧化
免疫球蛋白標記技術_酶標記抗體
免疫標記技術是用特定的物質標記抗原或抗體進行的抗原抗體反應。可借助各種儀器觀察結果或進行自動化測定，可在細胞、亞細胞、超微結構及分子水平上，對抗原抗體反應進行定性和定位研究；或應用各種液相和固相免疫分析方法，對液體中的抗原、半抗原或抗體進行定性和定量測定。實驗方法原理酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗
酶標抗體結合物的純化
在酶標記的溶液中，出現的是各種交聯物的混合物，有酶-抗體、酶-抗體-酶、抗體-抗體、酶-酶，甚至還有游離的酶和抗體。在這中間，除了抗體-酶和酶-抗體-酶外，其它都應該給予除去。1、50%飽和硫酸銨沉淀法。此法只能除去游離的酶及酶-酶聚合體。而不能除去其它不需要者。但是此法對酶標抗體的損耗少。2、過S
酶標記抗體HRP標記抗體戊二醛二步法
實驗概要本實驗介紹了酶標記抗體-HRP標記抗體中的戊二醛二步法的操作流程。實驗原理戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。主要試劑1. 0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M Na
酶標記抗體或抗原的制備
標記方法應符合：技術方法簡單、產率高，且重復性好；標記反應不影響酶和抗原或抗體的活性；酶標志物穩定，應避免酶、抗體（抗原）以及酶標志物各自形成聚合物等。1.戊二醛交聯法：同源雙功能交聯劑（1）一步法：連接AP。?①優點：操作簡便、有效，重復性好。②缺點：交聯時分子間比例不嚴格，大小不一，影響效果。（
簡述酶標記抗體的方法步驟
1、HRP標記抗體的方法 酶與抗體交聯的方法有許多種,根據酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
酶標記抗體或抗原的制備
標記方法應符合：技術方法簡單、產率高，且重復性好；標記反應不影響酶和抗原或抗體的活性；酶標志物穩定，應避免酶、抗體（抗原）以及酶標志物各自形成聚合物等。 1.戊二醛交聯法：同源雙功能交聯劑 （1）一步法：連接AP。 ①優點：操作簡便、有效，重復性好。 ②缺點：交聯時分子間比例不嚴格，大小
雙抗體夾心酶標抗體法的相關介紹
雙抗體夾心酶標抗體法是檢測抗原最常用的方法。將特異性抗體與固相載體連接，形成固相抗體，洗滌除去未結合的抗體及雜質。加受檢標本，使之與固相抗體接觸反應一段時間，讓標本中的抗原與固相載體上的抗體結合，形成固相抗原復合物。洗滌除去其他未結合的物質。加酶標抗體使固相免疫復合物上的抗原與酶標抗體結合，徹底
酶標抗體的質量鑒定與保存
1．酶活性和抗體效價測定： 采用雙向免疫擴散法（稀釋抗體）和DAB-H2O2 顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。 2．酶量和IgG量： 酶量（mg/ml）=OD403 ′0.4 IgG量（mg/ml）=（OD280- OD402 ′0.42）′0.94
酶標抗體的質量鑒定與保存
1． 酶活性和抗體效價測定 采用雙向免疫擴散法（稀釋抗體）和DAB-H2O2顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。 2． 酶量和IgG量 酶量（mg/ml）=OD403′0.4 IgG量（mg/ml）=（OD280-OD402′0.42）′0.94′0.62
酶標抗體的質量鑒定與保存
1． 酶活性和抗體效價測定采用雙向免疫擴散法（稀釋抗體）和DAB-H2O2 顯色反應檢測結合物中抗體效價和免疫沉淀線中的酶促反應。2． 酶量和IgG量酶量（mg/ml）=OD403 ′0.4IgG量（mg/ml）=（OD280- OD402 ′0.42）′0.94′0.62其中，0.42為酶蛋白本身
關于酶標抗體法的基本介紹
酶標抗體法，又名酶聯免疫吸附法（ELISA），利用酶標記抗原或抗體以檢測相應抗原或抗體的一種免疫學標記技術。其基本原理是使抗原或抗體結合到某種固相載體表面，并保持其免疫活性，而相對應的抗體或抗原與某種酶連接成酶標抗體或抗原，酶標抗體或抗原既保留了免疫活性可以與固相載體表面的抗原或抗體結合，又保留
酶標記抗體技術的注意事項
1.在具備高質量HRP的條件下，所要標記的抗體也要活性高,效價高(最低1∶16),純度高，親和力好，這是保證標記物效價高，免疫活性好的首要條件。 2.所使用試劑的PH和濃度及用量必須嚴格掌握。所用試劑，最好(或必需)新鮮配制。如在戊二醛標記法中所用戊二醛應為新鮮純品，因戊二醛儲存過久可形成縮和
酶標記抗體試劑及器材的介紹
(1)0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸餾水至200ml。 (2)1.25%戊二醛液：取25%戊二醛50μl與PH6.8的PBS1ml混合。 (3)1M PH9.5碳酸鹽緩沖液：取1M
非標記抗體酶法PAP法
PAP復合物是離體制備的HRP抗HRP復合物，它的制備方法較多，現簡介其中之一。（1）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射滅活的卡介苗（共lOmg），2周后重復1次，刺激機體免疫系統功能，1周后于背部脊柱兩旁皮內多點注射1．Oral乳劑[福氏完全佐劑，含HRP3。3m