酶標記抗體HRP標記抗體戊二醛二步法
實驗概要本實驗介紹了酶標記抗體-HRP標記抗體中的戊二醛二步法的操作流程。實驗原理戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。主要試劑1. 0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸餾水至200ml。2. 1.25％戊二醛液：取25％戊二醛50ml與PH6.8的PBS1ml混合。3. 1M PH9.5碳酸鹽緩沖液：取1M碳酸鈉3ml與1M碳酸氫鈉7ml混合。4. 0.2M賴氨酸溶液：稱賴氨酸29.2mg溶于0.01M PH9.5碳酸緩沖液1ml中。5. 0.15M PH7.4 PBS及生理鹽水。6. PH7.8飽和硫酸銨溶液及半飽和硫酸銨溶液。7. 萘氏試劑及聚乙二醇(PEG，MW2000)。8. 純化的特異性抗體或抗Ig抗體。9. HRP(RZ>3.0)。主要設......閱讀全文
酶標記抗體
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量的酶(
酶標記的概念
中文名稱酶標記英文名稱enzyme labeling定 義一種免疫標記技術。即將酶與抗體或抗原結合，通過與底物反應而顯色，用于示蹤組織切片或細胞等標本中的相應抗原或抗體。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫學檢測和診斷（三級學科）
酶標記的酶具有哪些特性？
? 用于標記抗體或抗抗體的酶須具有下列特性：有高度的活性和敏感性；在室溫下穩定；反應產物易于顯現；能商品化生產。? 如今應用較多的有辣根過氧化物酶（HRP）、堿性磷酸酶、葡萄糖氧化酶等，其中以HRP應用最廣。
什么是酶標記法？
酶與抗體交聯，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行，標記效果好，特別適用于實驗室的小批量制備。其標記程序為：將5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配制的0.06 mol/L的過碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鐘 ，
酶標記的技術特點
中文名稱酶標記英文名稱enzyme labeling定 義一種免疫標記技術。即將酶與抗體或抗原結合，通過與底物反應而顯色，用于示蹤組織切片或細胞等標本中的相應抗原或抗體。應用學科免疫學（一級學科），應用免疫（二級學科），免疫學檢測和診斷（三級學科）
酶標記抗體技術方法
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量
酶標記抗體的概述
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。高質量的酶(如
常用酶標記法介紹
酶與抗體交聯，常用戊二醛法和過碘酸鹽氧化法。郭春祥建立的HRP標記抗體的改良過碘酸鈉法簡單易行，標記效果好，特別適用于實驗室的小批量制備。其標記程序為：將5μg HRP溶于0.5ml蒸餾水中，加入新鮮配制的0.06 mol/L的過碘酸鈉（NaIO4）水溶液0.5ml，混勻置4℃冰箱30分鐘 ， 取出
酶標記抗體技術方法
酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質量
酶免疫技術抗體的酶標記方法
用于酶免疫技術的酶須具有下列特性:有高度的活性和敏感性;在室溫下穩定;反應產物易于顯現;能商品化生產。目前酶免疫技術檢測中常用的酶為辣根過氧化物酶(horseradish peroxidase,HRP)和堿性磷酸酶(AP),其次還有葡萄糖氧化酶、β-半乳糖苷酶、溶菌酶和蘋果酸脫氫酶等。由于辣根過氧化
免疫球蛋白標記技術_酶標記抗體
免疫標記技術是用特定的物質標記抗原或抗體進行的抗原抗體反應。可借助各種儀器觀察結果或進行自動化測定，可在細胞、亞細胞、超微結構及分子水平上，對抗原抗體反應進行定性和定位研究；或應用各種液相和固相免疫分析方法，對液體中的抗原、半抗原或抗體進行定性和定量測定。實驗方法原理酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗
單克隆抗體的標記(酶標記、熒光素標記、同位素標記和...2
單克隆抗體的標記(酶標記、熒光素標記、同位素標記和生物素標記)（3）移入透析袋中，在1000ml 0.01mol/L PH9.5碳酸鹽緩沖液中，4℃透析過夜，更換三次緩沖液，注意避光。?（4）吸取上述醛化好的HRP溶液3ml，加入5mg IgG的碳酸鹽緩沖液1ml，室溫輕攪2-3小時，避光；加入5m
單克隆抗體的標記(酶標記、熒光素標記、同位素標記和...1
目前動物用單抗，在動物疫病診斷和檢疫、妊娠檢測、性別鑒定等方面有廣泛的應用，大多以診斷試劑（盒）的形式提供，其中核心試劑為標記的單抗。下面將介紹最常用的幾種標記技術。?一、酶標記?1、辣根過氧化物酶（HRP）標記?辣根過氧化物酶（HRP）標記單抗和多克隆抗體的常用方法是過碘酸鈉法。其原理是HRP的糖
酶標抗體標記效果測定
酶標抗體標記效果測定：測定內容包括酶和抗體活性、結合物中酶含量和IgG含量、酶與IgG摩爾比值以及結合率。
酶標記抗體技術方法（一）
? 酶標記物包括酶標記抗原、酶標記抗體和酶標記SPA等。酶標記物質量的好壞直接關系到免疫酶技術的成功與否，因此被稱為關鍵的試劑。酶標記物中最常用的是酶標記抗體，它是將酶與特異性抗體經適當方法連接而成。酶標記抗體的質量主要取決于純度好、活性強及親和力高的酶和抗體，其次要有良好的制備方法。目前，高質
酶標記抗體技術方法（三）
3. 結果判定： 除標記物IgG量的計算，略有不同以外，其余均同戊二醛法。 IgG量(mg／ml)＝(OD280nm-OD403nm×0.3)×0.62 4. 試劑及器材: (1) 0.1M NaIO４：稱取241mg高碘酸鈉(廣州化學試劑廠，批號830602)溶于蒸餾水10ml中。 (2
酶標記抗體技術方法（二）
三、HRP標記抗體的方法 酶與抗體交聯的方法有許多種,根據酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。 戊二醛二步法 1. 原理：戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
酶標記物的純化及鑒定
常用的純化方法有葡聚糖凝膠G-200/G-150過柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。常用免疫電泳或雙相擴散法進行鑒定。1.出現沉淀線表示酶標記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。2.沉淀線經生理鹽水漂洗后，滴加酶的底物溶液，若沉淀線上顯色，則酶標記物中的酶活性仍保留。
酶標記物的純化及鑒定
常用的純化方法有葡聚糖凝膠G-200/G-150過柱層析純化和50%飽和硫酸銨沉淀提純等。常用免疫電泳或雙相擴散法進行鑒定。1.出現沉淀線表示酶標記物中的抗體（抗原）具有免疫活性。2.沉淀線經生理鹽水漂洗后，滴加酶的底物溶液，若沉淀線上顯色，則酶標記物中的酶活性仍保留。
酶標記抗體或抗原的制備
標記方法應符合：技術方法簡單、產率高，且重復性好；標記反應不影響酶和抗原或抗體的活性；酶標志物穩定，應避免酶、抗體（抗原）以及酶標志物各自形成聚合物等。1.戊二醛交聯法：同源雙功能交聯劑（1）一步法：連接AP。?①優點：操作簡便、有效，重復性好。②缺點：交聯時分子間比例不嚴格，大小不一，影響效果。（
β—半乳糖苷酶標記試劑
β—半乳糖苷酶標記試劑 β—半乳糖苷酶已被廣泛用于酶標記免疫分析，但主要用于免疫細胞化學。一種較好的底物是5—溴—4—氯—3—吲哚—β—D—吡喃型半乳糖苷(BCIG)，它可以產生一種深藍色的產物。此產物在乙醇和水中穩定，不溶解。 1．需要的溶液、試劑和特殊
簡述酶標記抗體的方法步驟
1、HRP標記抗體的方法 酶與抗體交聯的方法有許多種,根據酶的結構不同可采用不同的方法。對于制備HRP結合物，可用戊二醛二步法和過碘酸鈉法。尤以簡易過碘酸鈉法更為常用。 戊二醛二步法 原理 戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白
酶標記抗體或抗原的制備
標記方法應符合：技術方法簡單、產率高，且重復性好；標記反應不影響酶和抗原或抗體的活性；酶標志物穩定，應避免酶、抗體（抗原）以及酶標志物各自形成聚合物等。 1.戊二醛交聯法：同源雙功能交聯劑 （1）一步法：連接AP。 ①優點：操作簡便、有效，重復性好。 ②缺點：交聯時分子間比例不嚴格，大小
堿性磷酸酶標記試劑
BCIP／T是堿性磷酸酶最常使用的呈色底物，堿性磷酸酶標記的試劑應該用真核生物的堿性磷酸酶，因為這種酶容易被EDTA滅活。細菌酶難以終止其活性，易引起顯色過度，導致較高背景。 BCIP／T底物在酶結合位點形成強烈的黑紫色沉淀，此反應是一個穩定進行的過程。因此，可設定一個精確的反應對照。可以
酶標記抗體HRP標記抗體戊二醛二步法
實驗概要本實驗介紹了酶標記抗體-HRP標記抗體中的戊二醛二步法的操作流程。實驗原理戊二醛為一種雙功能試劑，通過其醛基分別與酶和免疫球蛋白上的氨基共價結合，形成酶-戊二醛-免疫球蛋白結合物。主要試劑1. 0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M Na
熒光素標記試劑與酶標試劑
(1)酶標試劑：酶標抗體僅需適當底物和普通光學顯微鏡即可高度敏感地檢出抗原。由于信號是通過吸收光的差異，而非發射光來檢測，底物的不溶性顯色產物分布在酶所在位置的周圍區域，因此這種檢測方法尚不能達到熒光技術的分辨率。 酶反應后出現沉淀，在酶所處位置周圍產生不溶性顯色產物，通過底物的顯色來檢出
酶標記抗體技術的注意事項
1.在具備高質量HRP的條件下，所要標記的抗體也要活性高,效價高(最低1∶16),純度高，親和力好，這是保證標記物效價高，免疫活性好的首要條件。 2.所使用試劑的PH和濃度及用量必須嚴格掌握。所用試劑，最好(或必需)新鮮配制。如在戊二醛標記法中所用戊二醛應為新鮮純品，因戊二醛儲存過久可形成縮和
酶標記抗體試劑及器材的介紹
(1)0.1M PH6.8磷酸緩沖鹽水(PBS)：取0.2M Na2HPO4 49ml, 0.2M NaH2PO4 51ml，NaCl1.8克，加蒸餾水至200ml。 (2)1.25%戊二醛液：取25%戊二醛50μl與PH6.8的PBS1ml混合。 (3)1M PH9.5碳酸鹽緩沖液：取1M
酶標記二抗的作用有哪些？
??? 酶標記二抗，是一類廣泛用于免疫學、分子生物學及臨床醫學的各個分支學科中的特異、敏感和安全的免疫化學制劑。目前較為常用的是將辣根過氧化物酶（HRP），經過碘酸鈉氧化而標記在抗體IgG 分子上，而制成HRP-抗體結合物。我司向用戶提供的各類酶標物，均根據本室建立的改良過碘酸鈉氧化法標記而成。
非標記抗體酶法PAP法
PAP復合物是離體制備的HRP抗HRP復合物，它的制備方法較多，現簡介其中之一。（1）制備抗HRP血清：健康雄性家兔（2．Okg以上），可先于足趾皮下注射滅活的卡介苗（共lOmg），2周后重復1次，刺激機體免疫系統功能，1周后于背部脊柱兩旁皮內多點注射1．Oral乳劑[福氏完全佐劑，含HRP3。3m