p16／Ki67雙染檢測助力宮頸癌前病變診斷

　　 研究發現，全球99%以上的宮頸癌病例都是由人乳頭瘤病毒（HPV）所引起，只有長期持續感染高危型HPV病毒才會導致高級別宮頸上皮內瘤變（CIN），進而發展為宮頸癌。由此，宮頸癌防治的關鍵在于篩查出高風險人群，找出高級別CIN患者，及時干預。采用免疫組化雙染技術在宮頸上皮細胞或組織中檢測兩種生物標志物p16和Ki-67以輔助診斷宮頸癌前病變已成為當前各國研究的重點，通過新檢測、新技術的臨床應用以實現宮頸癌篩查益處最大化，同時減少和避免由錯誤診斷和過度診斷帶來的不必要的資源浪費和潛在危害。

　　日前，在中華醫學會第十四屆全國細胞病理學會議暨細胞病理學讀片會上，中山大學附屬第一醫院病理科主任余俐教授同與會病理及腫瘤領域的專家深入交流并探討了CINtec PLUS p16/Ki-67免疫細胞化學雙染檢測對于輔助宮頸癌前病變診斷的重要性。

　　p16/Ki-67雙染檢測輔助細胞學

　　診斷有效降低陰道鏡轉診率

　　盡管細胞學在很多國家是標準的宮頸癌篩查方法，但在臨床實際操作中，存在諸多問題：由于其敏感性較低，重復性差，檢測結果存在一定的假陰性率和假陽性率；針對無明確意義的非典型鱗狀上皮細胞（ASC-US），不能明確是癌前病變還是反應性細胞改變；實驗室間的結果差異大；對腺癌不敏感；篩查間隔頻繁，至少每2~3年就要進行一次檢測。余俐教授指出：“宮頸癌篩查的目的是找出CIN2+病變。較為理想的宮頸癌篩查手段應該是在提高細胞學檢測敏感性的同時，能夠不損失其特異性，或者可以通過客觀的生物標志物，標記出高級別病變的細胞，以輔助細胞學檢測結果的判讀和診斷。”

　　2012年，美國病理學家協會（CAP）和美國陰道鏡和宮頸病理學會（ASCCP）聯合發布了下生殖道HPV相關的鱗狀病變的命名標準化計劃（LAST）指南，最終認定p16是有足夠的臨床研究數據證實其可用于宮頸癌前病變診斷的生物標志物。對于正常細胞的HPV一過性感染，免疫組化檢測不能檢測到p16表達；而在HPV轉化性感染后，抑癌基因失活，從而引起p16的過度表達，并被免疫組化檢測到。因此，p16可作為HPV感染的間接標志物，廣泛應用于宮頸癌前病變診斷。

　　LAST指南建議使用特定克隆號（E6H4）的 p16INK4a抗體作為檢測HPV感染是否影響到細胞周期調控的生物標志物，該克隆號是全球較早獲得IVD認證的p16INK4a抗體。2015年11月26日，國家食品藥品監督管理局批準羅氏診斷CINtec PLUS細胞學試劑盒［抗p16（E6H4）/Ki-67（274 -11 AC3）單克隆抗體雞尾酒試劑（免疫細胞化學法）］用于宮頸脫落細胞學的診斷。

　　p16在細胞周期的阻滯期具有抑制細胞增殖的功能，而另一種生物標志物Ki-67則指示細胞增殖。因此，在同一個細胞周期，生理機能正常細胞中不可能同時表達p16與Ki-67，如二者同時表達，則提示細胞周期失調。CINtec PLUS細胞學雙染檢測能夠同時檢測出HPV持續感染后過表達的p16和Ki-67，經過染色，p16核呈棕黃色或胞漿與核均呈棕黃色，Ki-67核呈紅色染色。如雙染陽性，強烈提示CIN2+病變，需立即進行陰道鏡檢查；如雙染陰性，可隨訪一年后復查。CINtec PLUS細胞學檢測可以幫助醫生客觀地判斷哪些人群需要做進一步的陰道鏡檢查，顯著降低了陰道鏡轉診率，減少患者不必要的檢查與治療。

　　2015年Besthesda指南推薦免疫細胞化學可輔助細胞學診斷。指南指出，在檢出HSIL病變中，p16/Ki-67雙染與細胞學檢測的特異性相當，且具有高敏感性。余俐教授表示：“CINtec

　　PLUS檢測基于客觀的生物標志物表達，能更準確地發現潛在的高級別病變患者，提高宮頸癌前病變檢出率，彌補了現有宮頸癌細胞學檢測的不足，降低漏診率，減少過度診斷，同時也為細胞病理醫生減輕了工作強度。”

　　研究證實CINtec PLUS

　　雙染檢測靈敏度與特異性高

　　美國食品藥品監督管理局（FDA）注冊的美國本土最大型的前瞻性宮頸癌篩查臨床試驗ATHENA研究，入組47208名受試者，進行了基于cobas HPV初篩策略和以細胞學為基礎篩查策略的三年隨訪試驗。結果顯示，針對HPV16/18以外的12種高危型HPV陽性患者，比較巴氏涂片細胞學與CINtec PLUS檢測評估三年內進展為CIN3+風險時發現：CINtec PLUS檢測能夠得到簡單、客觀的結果，明確提示患者風險以及是否需轉診陰道鏡。CINtec PLUS陽性患者在3年內進展為CIN3+病變的風險遠高于細胞學ASCUS以上的患者，具有更好的陽性預測值，需要轉診陰道鏡以減少漏診。CINtec PLUS陰性的患者，3年內發生CIN3+病變的風險低于細胞學NILM的患者，具有更好的陰性預測值，不需要轉診陰道鏡，幫助減少過度治療。

　　前瞻性PALMS研究入組來自5個歐洲國家的27349個病例。大量臨床數據顯示，CINtec

　　PLUS雙染檢測具有高靈敏度與高特異性（以CIN2+為終點），可用于ASC-US分流（靈敏度92%~94%，特異性78%~81%）、LSIL分流（靈敏度86%~94%，特異性51%~73%），HPV初篩后對高危型HPV陽性者分流（靈敏度74%~88%，特異性75%~83%），對細胞學陰性但高危型HPV陽性患者進行分流（靈敏度82%~92%，特異性79%~82%）。

　　該研究2015年發表在《癌癥細胞病理學》的最新數據顯示：對于細胞學ASC-US患者的分流中，CINtec PLUS檢測和HC2 HPV檢測的陰道鏡轉診率分別為26%與42%；對于細胞學LSIL患者的分流中，陰道鏡轉診率分別為53%與84%。證實使用CINtec PLUS檢測能夠顯著降低陰道鏡轉診率，減少不必要的陰道鏡轉診，避免過度診斷，同時能夠幫助臨床醫生對患者進行精準分層管理，進而實現早期干預。