qpcr原理及應用

一、原理

在指數階段，PCR 產物的量在每個循環中大約增加一倍。然而，隨著反應的進行，反應組分被消耗，最終一種或多種組分變得有限。此時，反應減慢并進入平臺期。

最初，熒光保持在背景水平，即使產物以指數方式累積，也無法檢測到熒光的增加。最終，足夠的擴增產物積累以產生可檢測的熒光信號。

發生這種情況的循環數稱為量化循環，或 q。由于 q值是在試劑不受限制的指數階段測量的，因此可以使用實時 qPCR 根據描述反應進程的已知指數函數可靠和準確地計算反應中存在的模板的初始量。

反應的 Cq主要由擴增反應開始時存在的模板量決定。如果在反應開始時存在大量模板，則需要相對較少的擴增循環來積累足夠的產物以產生高于背景的熒光信號。因此，反應將具有低的或早期的 Cq。

二、應用

實時熒光定量 PCR/qPCR 檢測已成為快速、靈敏地測定和定量各種生物樣品中核酸的首選工具，具有多種應用，例如基因表達分析、食品中轉基因生物的檢測和癌癥表型分析.

在研究實驗室中，qPCR 測定廣泛用于定量測量轉化細胞系中的基因拷貝數（基因劑量）或突變基因的存在。與逆轉錄 PCR (RT-PCR) 相結合，qPCR 分析可用于精確定量基因表達的變化，例如，通過測量細胞的變化，響應不同環境條件或藥物治療的表達增加或減少mRNA水平。

qPCR/實時 PCR 儀器

實時 PCR 檢測系統由配備光學檢測模塊的熱循環儀組成，用于測量每個擴增循環期間熒光團與目標序列結合時產生的熒光信號。

Bio-Rad 實時 PCR 檢測系統具有熱循環儀和可互換的模塊，用于熒光團的單重和多重檢測以及固定的實時 PCR 單元。所有 qPCR 系統都具有熱梯度功能。