qpcr原理及流程

一、QPCR原理

“qpcr原理是一種在DNA擴增反應中，以熒光化學物質測每次聚合酶鏈式反應（PCR）循環后產物總量的方法；應用于對PCR進程進行實時檢測。

檢測方法：加尾法和頸環法

miRNA很短，用mRNA的反轉錄方法無法得到足以定量的cDNA。所以，miRNA的反轉要求將miRNA序列進行延長，目前常用的序列延長反轉錄法包括莖環法和加尾法。

特色：

①RNA加尾和引物延伸法，樣本用量少（1μg）且不需分離miRNA。

②采用通用反轉錄引物，一次反轉錄產物可用于上百個miRNA檢測。

③檢測通量高，可同時檢測數十個miRNAs。

④不同末端成熟miRNA都能被加尾和反轉錄，保證定量準確性。

⑤配合QIAGEN試劑盒，保證實驗可靠性；

⑥擴增產物特異性高，通過產物熱解離曲線（融解曲線）判斷。