免疫電鏡標本固定實驗

實驗方法原理

實驗步驟

1. 血管灌注固定固定效果最好，能使超微結構得到很好的保存。灌注裝置由加壓氣球、壓力表、三通接頭和連接管道組成。不同的組織器官必須選擇合適的灌注壓力，詳見有關書籍。灌注固定一般維持 10～15 min。然后用相同的固定液繼續浸泡固定 2～4 h。

2. 浸泡固定組織塊切小后立即投入到固定液中，置于 4℃ 固定 2～4 h。游離培養細胞離心后去上清，加入 20 倍體積的固定液，用吸管將細胞團塊打散，固定 25～30 min。

3. 微波固定微波能加速組織內部分子、外部化學物質的運動和擴散。應用微波照射可以縮短固定時間，而且抗原能得到較好保存。一般 700 W 微波照射 10 s，在微波爐內放 1000 ml 的冷水以吸收熱量（保持溫度在 35℃ 以下），然后繼續用固定液固定 2～4 h。

注意事項

其他

目前常用免疫電鏡標本固定液主要有以下幾種。

1. 多聚甲醛-戊二醛混合固定液（簡稱 PG 固定液）推薦用 2％～4％ 多聚甲醛與 0.5％ 戊二醛的混合液，固定時間為 4 h。

2. 過碘酸鹽-賴氨酸-多聚甲醛混合固定液（稱 PLP 固定液）配制方法見本書第一章，固定時間為 6～12 h。該固定液選擇性地固定糖類，對超微結構及許多抗原的活性保存較好。低濃度的多聚甲醛能穩定蛋白與脂類。

3. 苦味酸-多聚甲醛-戊二醛固定液（稱 PAPG 固定液）含 4％ 多聚甲醛、15％（體積分數）苦味酸（2，4，6，-三硝基苯酚）、0.5％ 戊二醛，pH 7.3。苦味酸穿透力強，對抗原活性影響小。在前固定液中加入苦味酸替代鋨酸，能固定蛋白質，改善對膜和胞質的保存。

常用于包埋后的免疫染色。