免疫組織化學

實驗概要

免疫組化流程

實驗步驟

第一天：

1、組織切片置于60℃烘烤1hr

2、二甲苯1、2 分別浸泡15min，脫蠟

3、水化：100% Etoh 10min X 2

95% Etoh 5min X 1

85% Etoh 5min X 1

70% Etoh 5min X 1

注：以下步驟切勿讓組織處于干燥狀態！

4、將切片置于修復盒，浸入PBS中清洗5min，同時配制抗原修復液：3ml抗原修復液加入297ml純水中。

5、將4 中的PBS倒掉，加入配好的抗原修復液

6、將修復盒及切片放入微波爐“中高火”加熱煮沸（第一次約5min）。煮沸后取出，打開蓋子靜置1min，若修復液減少，則補充之。前后煮沸共需5次。

7、室溫冷卻 (蓋子勿打開) 30-60min。（配一抗）

8、棄修復液，再次加入PBS 洗3次X5min。

9、加入配好的羊血清-抗體混合液（B6乳鼠心臟約30ul/片，B6成年鼠約50ul/片，SD成年鼠約80ul/片）。

10.切片置于濕盒，4 ℃ 孵化過夜。

第二天

1、從冰箱中取出濕盒，置于室溫1hr。

切片放回修復盒，PBS 洗4min X 6次（搖）（避光，配二抗-羊血清混合液）

注：以下操作均在避光下進行！

2、取出切片，用紙巾擦干（切勿碰觸組織）

3、切片置于濕盒中，加二抗（保證組織浸沒在溶液中，所加體積參考第一天步驟9）

4、蓋上濕盒蓋子，封閉1hr

5、取出切片，重新放入修復盒，用PBS清洗4min X 6次。

6、取出切片，用紙巾輕輕擦干（切勿碰觸組織）

7、用含有DAPI的防淬滅封片劑封片

10. 用指甲油將蓋玻片周圍封閉

11. 處理好的切片用錫箔紙包好4℃ 保存。