國產重組抗CD20單抗抗腫瘤作用研究

抗CD20單克隆抗體是一類治療B細胞淋巴瘤的靶向藥物，利妥昔單抗Rituximab是第一代抗CD20單抗。目前我國市場上的抗CD20單抗僅有美羅華，也有一些藥企在研發抗CD20單抗，基本都是利妥昔的生物類似物。在新藥臨床前研究中，臨床前藥效學評價是一個非常重要的環節，它對于保證新藥的有效性、發現藥物的藥效特點、預測臨床療效及指導臨床用藥都是必不可少的。為了研究我國國產藥rh-anti-CD20ximAb的抗腫瘤效果，需要開展臨床前藥效學研究。

藥效學是指對新藥預期用于臨床的藥理作用的研究，即對新藥預期用于預防、治療、診斷作用的研究，用來評價新藥的生物活性和確定藥物的作用機理。美迪西生物醫藥是一家臨床前CRO公司，專門為客戶提供可定制的臨床前試驗服務方案，擁有十余年研發技術經驗積累，在藥物代謝、藥代動力學、藥效研究，以及毒理學方面擁有專業的知識。

以CD20為靶點的單克隆抗體，簡稱抗CD20單抗。盡管目前CD20的功能并不完全清楚，但是有證據表明抗CD20單抗殺傷B細胞來源的腫瘤和3種作用機制有關，分別是補體依賴的細胞毒作用（CDC, Complement Dependent Cytotoxicity）、抗體依賴的細胞毒作用（ADCC，Antibody Dependent Cell Mediated Cytotoxicity），以及抗體與CD20分子結合引起的直接效應，包括抑制細胞生長，改變細胞周期以及凋亡。

1、國產重組抗CD20單抗的體外CDC作用

選用兩種CD20高表達的腫瘤細胞，淋巴瘤細胞（Raji細胞）、人淋巴瘤細胞（Daudi細胞)和CD20陰性細胞(MX-1細胞),用乳酸脫氫酶(LDH)法細胞殺傷試驗試劑盒檢測重組抗CD20單克隆抗體體外對腫瘤細胞的補體依賴的細胞毒作用(CDC作用),并與對照品利妥昔單抗Rituximab比較,評價國產重組抗CD20單抗的體外CDC作用。

國產藥rh-anti-CD20ximAb對CD20陽性的Raji和Daudi細胞的體外CDC效應非常明顯,而且與對照品Rituximab的溶解細胞的CDC效應非常相似:對Raji細胞的3次重復平均半數有效抑制濃度(IC_(50))分別為740±76 ng/mL和809±39 ng/mL,平均EC_(50)比值為91.31±5.27 %。對Daudi細胞的3次重復平均半數有效抑制濃度(IC_(50))分別為729±57 ng/mL和846±145 ng/mL,平均EC_(50)比值為87.42±7.88%。

2、國產重組抗CD20單抗的體外ADCC作用

選用兩種CD20高表達的腫瘤細胞(Raji細胞、Daudi細胞)和CD20陰性細胞(MX-1細胞)作為靶細胞,用人外周血單核細胞(PBMC)作為效應細胞,在不同的效靶比條件下,用乳酸脫氫酶(LDH)法細胞殺傷試驗試劑盒檢測重組抗CD20單克隆抗體體外對腫瘤細胞的抗體依賴的細胞介導的細胞毒作用(ADCC作用),并與對照品Rituximab比較,評價國產重組抗CD20單抗的體外ADCC作用。

國產藥rh-anti-CD20ximAb對CD20陽性的Raji、Daudi細胞的體外ADCC效應非常明顯,而且與對照品Rituximab溶解細胞的ADCC作用非常相近。對于Raji、Daudi細胞，在效靶比分別為100:1、40:1、16:1、6:1情況下,國產藥與對照藥都隨著效靶比的降低,其對Raji和Daudi細胞的殺傷率也隨之降低,但二者在相同效靶比下,對Raji和Daudi細胞的殺傷率接近。而對于CD20陰性細胞MX-1,二者對MX-1細胞的殺傷率都在10%以下。

3、國產重組抗CD20單抗的飽和結合試驗和競爭性抑制試驗

國產重組抗CD20單抗體外與CD20高表達人B細胞淋巴瘤細胞系Raji細胞的高親和力結合，此實驗包括飽和結合試驗和競爭性抑制試驗。飽和結合結論說明國產rh-anti-CD20ximAb可以與CD20高表達B-淋巴細胞瘤Raji細胞高親和、可逆性、低容量地結合。競爭性抑制實驗結論說明國產rh-anti-CD20ximAb和對照品Rituximab對高表達CD20抗原人B細胞淋巴瘤Raji細胞與125I-rh-anti-CD20ximAb結合的抑制作用相似，二者的IC_(50)值分別為3.13±0.38μg/mL和3.45±0.59μg/mL,兩者非常接近。

4、國產重組抗CD20單抗在獼猴體內的實驗結果

獼猴靜脈滴注重組抗CD20單抗和對照品后，觀察獼猴外周血中的B淋巴細胞水平，三個劑量組之間比較及與對照品比較，觀察國產藥在獼猴體內是否達到了與對照品相似的CDC作用和ADCC作用。流式細胞儀檢查表明獼猴藥前C20陽性的B淋巴細胞量都在14.37-47.91%之間，各組間比較無統計差別。相同劑量的受試品和對照品(30 mg·kg~(-1)?1)，注射后2h-20d內，二者在統計學上均無明顯差別(P0.05)。

2011年我國已有生物醫藥公司研發重組抗CD20人源化單克隆抗體注射液，并申報臨床試驗申請。重組抗CD20人源化單克隆抗體注射液是新型人用重組單克隆抗體制品，具有自主知識產權，擬用于CD20陽性的B細胞非霍奇金淋巴瘤的治療。2013年9月該公司向國家藥監局提交了重組抗CD20人源化單克隆抗體注射液的臨床試驗申請，2013年12月獲得受理，2016年收到藥物臨床試驗批件。目前我國多家藥企致力于研發抗CD20單抗，預計未來幾年會陸續有產品獲批上市，從而打破美羅華的壟斷局面，同時預計國產的抗CD20單抗的價格優勢，可以提升抗CD20單抗在非霍奇金氏淋巴瘤領域的滲透率。