如何確定數字PCR的LOB？

數字PCR技術是一項新的核酸檢測和定量技術。空白檢測限LOB （Limit of Blank）是判斷數字PCR技術檢測能力的重要參數。

LOB（the limit of blank）是一項統計學實驗參數。在可信度大于95%的概率下，對于不含有分析物的樣品（空白樣品），LOB是可能觀察到的最高檢測結果。換句話說就是最大的假陽性數。

為什么要在數字PCR中計算LOB ?

在數字PCR (dPCR)中，多種因素可以引起假陽性。定量核酸時確定假陽性的cutoff對dPCR檢測的穩定性至關重要。為了定義這個cutoff，檢測閾值通常設置在LOB值之上，而在檢測校準期間必須首先為每個目標確定空白LOB值。此外，實驗LOB值對于判斷反應是正還是負以及計算LOD值都是必要的。

95%置信度LOB如下表所示：

R：重復次數，一般≧30

μ和α：分別為假陽性個數的平均值和標準方差

μ_corr：校正平均值

當μ=0（即假陽性永遠不會出現），則LOB（95%）=0

當LOB為非零時，可以用概率分布加權的“減去假陽性”的方法來校正實驗樣品中目標核酸的量。

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