1、抗原: 蛋白質、多肽、細胞器、細胞、組織等。
2、免疫方式:皮下注射、腹腔注射、靜脈注射、肌肉注射等。
3、不同動物免疫所需抗原量(以蛋白免疫為例)
| >18-20kDa | <18-20kDa | |||
| 動物 | 抗原量 | 最佳抗原量 | 抗原量 | 最佳抗原量 |
| 兔子 | 20-200 | 100 | 50-400 | 200 |
| 小鼠 | 2- 40 | 15 | 4- 60 | 40 |
| 大鼠 | 10-50 | 30 | 20-150 | 50 |
| 綿羊 | 100-1000 | 200 | 200-1000 | 400 |
| 母雞 | 20-200 | 100 | 50-400 | 200 |
| 單位:微克 |
4、免疫方案(以免疫兔子為例) :
| 天數 | 0 | 14 | 28 | 38 | 56 | 66 | 87 |
| 注射 | x | x | x | x | |||
| 采血 | 2ml | 2ml | 2+20ml | 2+50-70ml |
5、注意:
第一次免疫用完全佐劑與免疫原混合,以后加強免疫用不完全佐劑與免疫原 混合,采取多點,時間間隔式免疫法。
如果用細胞免疫兔子,那么每次免疫所需細胞量為 2-3 x 107cells。 在連續免疫完三次后,需要少量取血進行ELISA檢測,檢測所免疫動物的抗 體滴度,一般滴度能達到 1:10,000-50,000。在處死所免疫的動物前一周應加 強一次免疫。
如果用小鼠免疫,可以尾靜脈小量采血(大約 50μ l) ,最后取眼球大量采血 (大約 500-1000μ l) ;如果用兔子免疫,可以耳緣靜脈小量取血(大約 2mL), 最后心臟大量取血(50-100mL)。
按血清制備的標準方法將血清分離,并且分裝成小份,儲藏在- 80oC。
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