嵌合RNA外泌體疫苗治療突變非依賴腫瘤獲揭示

在國家自然科學基金的資助下，暨南大學教授張灝團隊聯合荷蘭格羅寧根大學和汕頭大學等單位以嵌合RNA作為腫瘤新生抗原，研制出嵌合RNA外泌體疫苗，并開展了食管癌免疫治療的實驗研究。相關研究日前發表于Journal Extracellular Vesicles（JEV）。熊梟和柯秀榮博士為該論文第一作者。

基因突變是重要的腫瘤發病機制也是目前多數靶向治療的用藥指征，但在很多腫瘤中這些靶點突變很低或者缺乏，現有靶向藥物難有用武之地。以我國高發的惡性消化道腫瘤食管癌為例，臨床上檢測不到有效的基因突變并缺乏針對性的靶向藥物，近年來測序研究發現食管等正常組織體細胞存在高頻度的基因突變，包括諸多腫瘤驅動基因的突變，比如正常食管組織的NOTCH1突變比食管癌組織高出數倍。

針對大量存在的“突變非依賴腫瘤”，張灝團隊以食管癌為模型尋找突變之外的靶點，由此發現了RNA異常剪接產生的嵌合RNA。通過多維篩選，找出了一批腫瘤特異性的嵌合RNA，并發現了嵌合RNA翻譯產生的嵌合蛋白。其中A-Pas是RNA異常剪接過程中由內含子反義鏈剪接成的腫瘤特異性嵌合產物，在食管癌發生和轉移起驅動作用，并和腫瘤免疫相關，具有治療靶點和新生抗原的價值。

根據上述發現，張灝團隊以A-Pas作為靶點開展腫瘤免疫治療。腫瘤免疫治療除了目前最受關注的免疫檢查點抑制劑之外，還包括腫瘤疫苗、CAR-T等免疫細胞治療、溶瘤病毒以及免疫因子等。其中腫瘤疫苗具有獨特的優勢，包括能夠產生主動免疫、可產生長期免疫記憶、通過 “多彈頭導彈”實施多靶點攻擊產生協同效應等。在各種腫瘤疫苗中，樹突狀細胞（DC）以其強大的抗原提呈能力，使DC疫苗能夠有效誘導抗原特異性免疫應答，展現了良好的抗腫瘤效果。但是細胞類疫苗面臨著包括增值數量有限、質控復雜、來源受限、生產和保存技術難度等諸多問題。

外泌體是細胞外囊泡的主要類型，是由各種細胞釋放的納米級雙脂質包裹的囊泡，外泌體能夠遞送細胞內的各類分子至相鄰或遠處的細胞和器官，介導各種生物功能。外泌體這種天然遞送機制可以用于開發包括疫苗在內的多種治療手段。DC來源的外泌體攜帶許多關鍵的DC免疫調節分子。外泌體疫苗作為非細胞類疫苗，具有結構穩定、組成相對明確、安全性高、易保存、適合批量生產、可提高免疫應答的特異性等優勢。

在前期建立的外泌體技術平臺基礎上，張灝團隊以A-Pas為新抗原，應用DC來源外泌體研發了嵌合RNA外泌體疫苗。體外實驗證明A-Pas促進DC成熟并升高T細胞的特異性性殺傷能力。在動物模型體內實驗中發現嵌合RNA外泌體疫苗可有效地抑制腫瘤生長并顯著地延長了荷瘤小鼠的生存時間。進一步研究發現嵌合RNA外泌體疫苗通過刺激先天免疫和獲得性免疫重塑了腫瘤免疫微環境，并通過 CD8 T細胞依賴機制發揮免疫治療作用。

張灝團隊長期以來開展RNA異常剪接及其嵌合產物在腫瘤發生演化中的機制研究和診斷治療轉化。團隊此前還研發了嵌合RNA唾液外泌體液體活檢，制備了嵌合RNA翻譯蛋白的單克隆抗體和嵌合RNA 條件性基因敲入小鼠模型。嵌合RNA外泌體疫苗為治療包括食管癌在內的“突變非依賴腫瘤”提供了新的方案。