巨噬細胞的培養方法

　　巨噬細胞也建有無限細胞系，大多來自小鼠，如P338D1、S774A.1、RAW309Cr.l等，均獲惡性，培養中呈巨噬細胞形態和吞噬功能，易于傳代和瓶壁分離，但難以建株。培養巨噬細胞可用各樣方法和各種來源來獲取細胞，以小鼠腹腔取材法最為實用，其法如下：

　　1、實驗前三天，向每只小鼠腹腔內注入無菌硫羥乙酸肉湯1ml（勿注入腸內）。

　　2、引頸殺死動物，手提鼠尾將全鼠浸入70%酒精中3～5秒。

　　3、置動物于解剖臺上，用針頭固定四肢，雙手持鑷撕開皮膚拉向兩側，暴露出腹膜，但勿傷及腹膜壁。

　　4、再用70%酒精擦洗腹膜壁后，用注射器吸10mlEagle液注入腹腔中，同時從兩側用手指揉壓腹膜壁，令液體在腹腔內充分流動。

　　5、用針頭輕輕挑起腹壁，使動物體微傾向一側，使腹腔中液體集于針頭下吸取入針管內。

　　6、小心拔出針頭，把液體注入離心管中，250g4℃離心10分鐘，去上清，加10mlEagle培養基。

　　7、計數細胞，每只小鼠可產生20～30×105細胞，其中90%為巨噬細胞。

　　8、為獲取3×105帖附細胞/平方厘米，需接種2.5×106/ml。

　　9、為純化培養細胞，去除其它白細胞，接種數小時后，去除培養液，用Eagle液沖洗1～2次后，再加新Eagle培養液置37℃，5%CO2溫箱中培養。