數字pcr用不起來的原因

因為模板質量問題。

1）模板提取不完整，其中不含你的目的基因，或目的基因含量太低。可以跑個電泳看看提取的DNA，PCR陽性樣品與陰性樣品是否有明顯差別。如果確定是這種問題，可以增加模板量試試，但不一定行得通。

2）模板里面殘留某種試劑成份，可能抑制Taq聚合酶的活性，如果是這種情況，可以用試劑盒把模板再純化一下，或將模板做個梯度稀釋以確定最佳的模板量。

數字pcr儀是分子診斷實驗室的重要工具，直接影響臨床檢測結果的準確性、重復性、甚至工作效率。其主要用于科研及臨床的基因擴增定性PCR基因擴增熒光/酶免終點定量DNA基因擴增基因芯片等其他基因分析應用的基因擴增適合國內外各種PCR試劑盒傳染病類、科研類等。

模板濃度過低：

退火溫度過高。有可能，可以做個梯度PCR試一下。

dNTP濃度低時PCR產率及特異性均增高，適合于用擴增摻入法標記生物素及放射性元素。當100μl PCR液中含dNTP各40μmol/L時就足以合成2.6μg的DNA（dNTP消耗一半）,所以,你不小心多加了4倍的量,會很影響PCR結果,即Taq酶活力要降低20～30%，即底物抑制。