比色法檢測血清堿性磷酸酶（ALI）實驗

一、 實驗試劑：

l. 0.1mol/L碳酸鹽緩沖液（PH10.0）

溶解無水碳酸鈉6.39g碳酸氫鈉3.36，4-氨基安替比林結合1.5g于800ml蒸餾水中，將此溶液入1000ml容量瓶內，加蒸餾水至刻度，置棕色瓶中保存。

2. 20mmol/L 磷酸苯二鈉溶液：先將500ml蒸餾水煮沸，消滅微生物，逐漸加入磷酸苯二鈉2.18g（如含2分子結晶水則應稱取2.54g）冷卻后加氯仿2ml防腐，置冰箱保存，稱底物溶液．

3. 鐵氰化鉀溶液：分別稱鐵氰化鉀2.5g，硼酸17g各自溶于400 ml蒸餾水中待兩液混合后，加蒸餾水至1000ml，置棕色瓶中避光保存，如出現藍綠色即棄去。

4. 酚標準貯存液（1mg/ml）簡易購買商品標準液

5. 酚標準應用液0.05mg/ml：酚標準貯存液5m1，加蒸餾水至100ml，此夜只能保存2-3天。

二、 實驗操作：取16mm×100mm試管按表進行編號與測定

血清堿性磷酸酶測定步驟：

立即混勻，在波長51Onm，以蒸餾水調零點，讀取各管吸光度．測定管吸光度，減去對照管吸光度，查標準曲線表，求出酶的活力單位。

金氏單位定義：100ml，血清在37℃，與底物作用5分鐘，產生1mg酚為一個金氏單位

標準曲線繪制：

立即混勻，在波長510nm，以零號管調零，讀取各管吸光度，并和相應酶活力單位繪制標準曲線。

參考值：成年人：3 - 13 金氏單位

兒童：  5 - 28 金氏單位

1. 鐵氰化鉀溶液中加入硼酸有穩定顯色作用。

2. 底物中不應含有游離酚，如空白管顯紅色，說明磷酸苯二鈉開始分解應棄去不用。

3. 加人鐵氰化鉀后必須迅速混勻，否則顯色不充分。

4. 黃疸血清及浴血血清分別作對照者，一般血清標準本可以共用對照管。