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  • 發布時間:2019-12-19 12:59 原文鏈接: 細胞培養技術中的關鍵因素

    一、準備工作對開展細胞培養異常重要,推備工作中某一環節的疏忽可導致實驗失敗或無法進行。準備工作的內容包括器皿的清洗、干燥與消毒,培養基與其他試劑的配制、分裝及滅菌,無菌室或超凈臺的清潔與消毒,培養箱及其他儀器的檢查與調試等。

    1.清潔、消毒、液體

    直接接觸細胞的用品要超凈處理——無非必須分子

    直接接觸細胞的用品要徹底消除微生物

    超凈和消毒過的樣品要絕對密閉保存,標記消毒時間

    實驗室保持潔凈,隨時消毒

    盡量采用商品化一次性用品

    操作者也要清潔和消毒

    緩沖液要符合生理滲透壓(280~310 mOsm)和pH(7.2~ 7.4 )

    2.玻璃器皿超凈

    去污劑煮沸30min(超聲波震蕩30min) 溫水刷洗 流水沖洗 酸性洗滌液浸泡 流水沖洗 蒸餾水沖洗 純水漂洗 在潔凈溫箱中烤干 密封消毒

    3.消毒

    干熱——玻璃器皿  160℃,120min

    濕熱(高壓,120 ℃ )  10~20磅,20~30min

    紫外線——空氣

    消毒劑——場面

    微孔過濾——液體  0.22um、0.45um

    二、細胞生長的條件和培養基要求:選擇合適的培養基,保證全過程的無菌
    細胞的營養需要:氨基酸、維生素、碳水化合物、無機離子、蛋白質、促生長因子。其中很多成分系用血清、胚胎浸出液等提供,在很多情況下還需加入10%的胎牛或新生牛血清。

    培養基的制備:a..濃度要準-滲透壓、b. 酸堿度要適宜-酸度計

    細胞的生存環境:a.. 溫度、b.氣相、 c.滲透壓--290mmol/L


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