基本方案
| 實驗材料 | 蛋白質 |
|---|---|
| 試劑、試劑盒 | 胎牛血清 甲硫氨酸 半胱氨酸 |
| 儀器、耗材 | 培養瓶 離心機 轉子 |
| 實驗步驟 |
1. 接種2.5×106細胞于盛有4 ml 含10%胎牛血清的完全培養液的60 mm 肌組織培養皿中。對每一假定重組病毒分別準備一個平皿供感染用，并準備一個對照平皿供野生型桿狀病毒感染。于27℃溫育2 h。使細胞貼壁。吸出培養液，然后加入1 ml 含重組病毒或1 ml 含野生型病毒的無血清完全培養液，感染復數（MOI）為5~10。
3. 小心去除培養液，用不含甲硫氨酸或不含甲琉氨酸和半胱氨酸的培養液洗細胞一次， 加入1 ml 已添加EXPRE35S35S至0.25~0.5 mCi/ml 的同樣培養液。于27℃溫育3~4 h。
4. 將細胞和培養物上清移至一支15 ml 聚丙烯離心管，4℃ 1 000 g 離心10 min。 5. 進行SDS-PAGE分離裂解物中的蛋白。每條泳道加20~40 μg 細胞總蛋白或全部的免疫沉淀物。
6. 用放射自顯影使蛋白質顯跡。從放射自顯影圖查看感染了重組病毒（而不是野生型桿狀病毒）的細胞是否出現預期分子量的蛋白質。
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