黃瓜花葉病毒（CMV）ELISA檢測試劑盒使用說明

本試劑盒只能用于科學研究，不得用于醫學診斷

黃瓜花葉病毒（CMV）ELISA檢測試劑盒

使用說明書

檢測原理黃瓜花葉病毒（CMV）ELISA檢測試劑盒說明書

試劑盒采用雙抗體夾心、、。往預先包被黃瓜花葉病毒（CMV）捕獲抗體的包被微孔中，依次加入陰性對照、陽性對照、樣本、HRP標記的檢測抗體，經過溫育并徹底洗滌。用底物TMB顯色，TMB在過氧化物酶的催化下轉化成藍色，并在酸的作用下轉化成最終的黃色。顏色的深淺和樣品中的黃瓜花葉病毒（CMV）呈正相關。用酶標儀在450nm 波長下測定吸光度（OD 值），判斷樣品是否含有黃瓜花葉病毒（CMV）。

樣品收集、處理及保存方法 黃瓜花葉病毒（CMV）ELISA檢測試劑盒說明書

1.   血清：使用不含熱原和內毒素的試管，操作過程中避免任何細胞刺激，收集血液后，3000轉離心10分鐘將血清和紅細胞迅速小心地分離。

2.  血漿：EDTA、檸檬酸鹽或肝素抗凝。3000轉離心30分鐘取上清。

3.  細胞上清液：3000轉離心10分鐘去除顆粒和聚合物。

4.  組織勻漿：將組織加入適量生理鹽水搗碎。3000轉離心10分鐘取上清。

5.  保存：如果樣本收集后不及時檢測，請按一次用量分裝，凍存于-20℃，避免反復凍融，在室溫下解凍并確保樣品均勻地充分解凍。

自備物品   黃瓜花葉病毒（CMV）ELISA檢測試劑盒說明書

1. 酶標儀（450nm）

2. 高精度加樣器及槍頭：0.5-10uL、2-20uL、20-200uL、200-1000uL

3. 37℃恒溫箱

操作注意事項  黃瓜花葉病毒（CMV）ELISA檢測試劑盒說明書

1.   試劑盒保存在2-8℃，使用前室溫平衡20分鐘。從冰箱取出的濃縮洗滌液會有結晶，這屬于正常現象，水浴加熱使結晶完全溶解后再使用。

2.   實驗中不用的板條應立即放回自封袋中，密封（低溫干燥）保存。

3.   預處理后的樣本無需稀釋，直接取10μL加樣即可。

4.   嚴格按照說明書中標明的時間、加液量及順序進行溫育操作。

5.   所有液體組分使用前充分搖勻。

黃瓜花葉病毒（CMV）ELISA檢測試劑盒說明書試劑盒組成

試劑的準備

20×洗滌緩沖液的稀釋：蒸餾水按1：20稀釋，即1份的20×洗滌緩沖液加19份的蒸餾水。

洗板方法

1.   手工洗板：甩盡孔內液體，每孔加滿洗滌液，靜置1min后甩盡孔內液體，在吸水紙上拍干，如此洗板5次。

2.   自動洗板機：每孔注入洗液350μL，浸泡1min，洗板5次。

操作步驟

1. 從室溫平衡20min后的鋁箔袋中取出所需板條，剩余板條用自封袋密封放回4℃。

2. 設置陰、陽性對照孔和樣本孔，陰、陽性對照孔中加入陰性對照、陽性對照各50μL；

3. 待測樣本孔先加待測樣本10μL，再加樣本稀釋液40μL；

4. 隨后陰、陽性對照孔和樣本孔中每孔加入辣根過氧化物酶（HRP）標記的檢測抗體100μL，用封板膜封住反應孔，37℃水浴鍋或恒溫箱溫育60min。

5. 棄去液體，吸水紙上拍干，每孔加滿洗滌液，靜置1min，甩去洗滌液，吸水紙上拍干，如此重復洗板5次（也可用洗板機洗板）。

6. 每孔加入底物A、B各50μL，37℃避光孵育15min。

7. 每孔加入終止液50μL，15min內，在450nm波長處測定各孔的OD值。

結果判斷

1.  試驗有效性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；

               陰性對照孔OD值平均值≤0.15。

2.  臨界值（Cut off）計算：臨界值=陰性對照孔平均值+0.15

3.  陰性判斷：樣品OD值＜臨界值（Cut off），樣品為陰性

4.  陽性判斷：樣品OD值＞臨界值（Cut off），樣品為陽性

試劑盒性能

1. 準確性：陽性對照孔OD值平均值≥1.00；陰性對照孔OD值平均值≤0.15，說明試驗結果有效。

2. 特異性：不與其它可溶性結構類似物交叉反應。

3. 重復性：板內、板間變異系數均小于15%。

4. 貯藏：2-8℃，避光防潮保存。

5. 有效期：6個月

免責聲明

1.   試劑盒僅供研究使用，不得用于臨床實驗或人體實驗，否則所產生的一切后果，由實驗者承擔，本公司概不負責。

2.   嚴格按照說明書操作，實驗者違反說明書操作，后果由實驗者承擔。