鼻咽癌人源抗獨特型基因工程抗體的原核表達及鑒定

摘要: 目的構建鼻咽癌人源抗獨特型單鏈抗體原核表達載體, 對其產物做初步鑒定, 為鼻咽癌疫苗制備奠定基礎。方法采用分子克隆技術, PCR 擴增G22ScFv 基因, 并將其克隆到原核表達載體pET25b(+)上, 將重組子轉化大腸桿菌BL21 (DE3), 經IPTG 誘導表達后, 表達的蛋白經His- tag 純化試劑盒純化后復性。SDS- PAGE 及Western blot 分析融合蛋白。結果構建的原核表達載體pET25b(+)- G22 經測序檢測, 序列正確。在大腸桿菌中G22ScFv 以包涵體形式獲高效表達, SDS- PAGE 及Western blot 鑒定表達的目的蛋白Mr為25 kD, 同時證實載體構建及表達均正確。目的蛋白經試劑盒純化后電泳分析純度達95%以上。結論利用基因重組技術, 在原核細胞中表達出重組G22ScFv 并得到純化, 為研究鼻咽癌疫苗打下了基礎。