ADC單抗藥物的分子量、氨基酸序列、糖基化位點以...（一）

ADC 單抗藥物的分子量、氨基酸序列、糖基化位點以及ADC 藥物結合位點鑒定

1. 前言

單克隆抗體藥物是具有高度特異性的靶向藥物，能夠特異性作用于腫瘤細胞，被譽為治療惡性腫瘤的“生物導彈”。ADC 抗體藥，則是在抗體蛋白的特定天然氨基酸上非定點偶聯具有抗腫瘤作用的化療藥物（或稱小分子藥物），以增加單克隆抗體的療效、并降低小分子藥物的副反應。對此，研究人士表示，這相當于在“生物導彈”上精確地裝上了“核彈頭”，使得治療更加安全、有效、定向。目前，在整個腫瘤藥研究領域，ADC 抗體藥物已得到了業內的普遍認可。不少跨國藥企相繼投身到 ADC 藥物的研究開發中。為了保證 ADC 單抗藥物的安全性和有效性，以及對單抗藥物生產過程進行實時監控，對于 ADC 單抗藥物的整體分子量的測定、氨基酸序列的鑒定、糖基化位點的確認、ADC 藥物結合位點的確認、二硫鍵的定位、糖鏈結構的解析等重要的 ADC 藥物分析指標的測試和確認，越來越受到各大制藥公司的關注。目前，隨著生物質譜技術的不斷發展和推廣，基于生物質譜的單抗分析技術也開始全面、快速的建立起來。

Q-Exactive 串聯質譜儀結合了高選擇性的四級桿質譜檢測器和高分辨、高靈敏度的 Orbitrap^TM 質量分析器，大大提高了離子的選擇性、靈敏度和質量精度。該系統具有 140,000 的分辨率（FWHM）、更高的靈敏度、更快的掃描速度和更大的動態范圍，同時結合了 HCD 碎裂技術，可以實現串級質譜碎裂和鑒定，為深度復雜樣品分析，包括蛋白質組學、代謝組學、脂類組學等樣品的鑒定，翻譯后修飾和定量分析，提供了全面、高效和快速的質譜分析平臺。同樣，Q-Exactive 質譜可以有效地應用到 ADC 單抗藥物的研發和生產監控中，基本的實驗分析流程如下所示。

圖 1. 單抗分析基本流程圖

2. 實驗部分

2.1 分子量測定

2.1.1 儀器和試劑

質譜儀器：Q-Exactive（賽默飛世爾科技，美國）；

色譜儀器：Accela 液相色譜系統（賽默飛世爾科技，美國）；

色譜柱：Agilent Zorbax 300, SB-C8, 3 μm，2.1×50 mm ；

試劑：二次去離子水，色譜級乙腈，色譜級甲酸。

2.1.2 儀器方法

色譜分析條件：具體見表 1；

質譜分析條件：具體見表 2；

表 1. 單抗分子量測定的色譜分析條件

表 2. 單抗分子量測定的質譜分析條件