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  • 發布時間:2020-07-06 17:08 原文鏈接: LoWry法對可溶性蛋白含量檢測原理

      LoWry法是雙縮脲法(Biuret)和福林酚法(Folin-酚)的結合與發展。其原理是蛋白質溶液用堿性銅溶液處理后,堿性銅試劑與蛋白質中的肽鍵作用產生雙縮脲反應,形成銅—蛋白質的絡合鹽。再加入酚試劑后,在堿性條件下,這種被作用的蛋白質上的酚類基團極不穩定,很容易還原酚試劑中的磷鎢酸和磷鉬酸,使之生成磷鎢藍和磷鉬藍的混合物。這種溶液藍色的深淺與蛋白的含量成正相關,所以可以用于蛋白質含量的測定。

      LoWry法除使肽鏈中酪氨酸、色氨酸和半胱氨酸等顯色外,還使雙縮脲法中肽鍵的顯色效果更強烈,其顯色效果比單獨使用酚試劑強3-15倍,約是雙縮脲法的100倍。由于肽鍵顯色效果增強,從而減少了因蛋白質種類不同引起的偏差。LoWry法適于微量蛋白的測定,對多個樣品同時測定較為方便。但對不溶性蛋白和膜結合蛋白必須進行預處理(如加入少量的SDS)。

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