人臍動脈平滑肌細胞培養實驗——消化法
人臍動脈平滑肌細胞培養可以:(1)獲得人臍動脈平滑肌細胞;(2)作為重大動脈疾病的研究底物;(3)研究血管模型;(4)對血管疾病的藥理學和治療繼續提供信息。實驗方法原理運用消化法進行人臍動脈血管平滑肌細胞的培養,并用倒置顯微鏡進行形態學觀察和用免疫組化對培養細胞進行鑒定。實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶消化液胰蛋白酶膠原酶彈性蛋白酶DMEM儀器、耗材眼科剪滴管離心機培養皿CO2培養箱實驗步驟一、實驗步驟1. 冰冷無菌D-Hanks'液中漂洗,用眼科剪仔細清除脂肪、包膜、血管等組織,轉入青霉素小瓶中,加入少量無菌D-Hanks'液,用眼科剪剪成0.1-1.0 mm3 大小的碎片。 2. 用滴管輕輕吸出上層細小脂肪碎塊和油滴,再用無菌D-Hanks'液反復清洗8~10 次。 3. 加入 10 倍體積無菌膠原酶消化液(1 mg/mL),......閱讀全文
人滑膜細胞原代培養實驗_酶消化法
人滑膜細胞原代培養可應用于:(1)細胞保種;(2)用于相應細胞生理、形態學研究;(3)用于相關疾病研究。實驗方法原理將人滑膜從機體中取出,經胰酶、螯合劑(常用EDTA)處理,分散成單細胞,置α-MEM生長培養基中培養,使細胞得以生存、生長和繁殖。實驗材料滑膜組織試劑、試劑盒Ⅰ型膠原酶胎牛血清生理鹽水
常規細胞培養初代消化培養法
1.準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。4.剪切:用眼科剪把
常規細胞培養初代消化培養法
1.準備:取各種已消毒的培養用品置于凈化臺面,紫外線消毒20分鐘。開始工作前先洗手、75%酒精擦拭手至肘部。2.布局:點燃酒精燈,安裝吸管帽。3.處理組織:把組織塊置于燒杯中,用Hanks液漂洗2~3次,去除血污;如懷疑組織可能污染,可先置于含有青鏈霉素的混合液中30~60分鐘。4.剪切:用眼科剪把
大鼠星型膠質細胞培養實驗——胰蛋白酶消化法
實驗材料大鼠胚胎試劑、試劑盒L-15培養基膠原酶DnaseD-MEM-BSFCS-DMEM阿糖胞苷儀器、耗材離心機水浴鍋培養瓶培養箱實驗步驟一、分離大鼠胚胎(16-18周)新皮層,置于L-15(或Hank's平衡鹽/DMEM溶液,無Hepes)培養基中,除去腦膜和血管、海馬、尾核和其他非皮層
大鼠大腦皮層神經元細胞培養實驗——酶消化法
實驗材料小鼠試劑、試劑盒酒精解剖液胰蛋白酶DMEM F12B27阿糖胞苷培養液儀器、耗材培養箱實驗步驟一、小鼠大腦皮層神經元原代培養步驟1. ?于無菌條件下切取鼠頭并以75%酒精浸泡1 min,解剖出完整鼠腦。2. ?預冷解剖液中分離去除軟膜、血管、取大腦皮質漂洗,用眼科剪將皮質反復剪切成碎塊。3.
細胞傳代實驗_消化法
實驗方法原理用胰蛋白酶消化細胞,用于貼壁細胞傳代培養。實驗材料細胞試劑、試劑盒胰蛋白酶酒精PBS儀器、耗材超凈工作臺酒精燈酒精棉球培養箱顯微鏡吸管離心管離心機實驗步驟一、傳代前準備?1. ?預熱培養用液:把已經配制好的裝有培養液、PBS液和胰蛋白酶的瓶子放入37℃水浴鍋內預熱。?2. ?用75%酒精
胎兒臍動脈舒張期臍血流缺失病例報告1
隨著社會經濟水平及圍產醫學的不斷發展,圍產兒的預后越來越受到重視,利用及時、高效的宮內監測手段,及時發現、及時干預,以便選擇最佳的分娩時機和分娩方式改善妊娠結局。胎動計數、胎心電子監護是目前比較常用的監護方式,但對于反映胎兒的宮內情況存在一定的局限性。彩色多普勒超聲的發展,已能夠監測宮內胎兒臍血流,
胎兒臍動脈舒張期臍血流缺失病例報告2
出院后于我科門診定期產檢復查。2018-10-08我院胎兒彩超診斷意見:宮內妊娠,臀位,單活胎;胎兒頭圍、雙頂徑、腹圍大小相當于妊娠約27周,股骨長相當于妊娠約25周(雙頂徑68mm,股骨長52mm,頭圍255mm,腹圍235mm);胎盤成熟度0度,厚29mm;羊水量正常,羊水深度42mm;BPS評
大鼠主動脈內皮細胞培養實驗——貼塊法
大鼠血管內皮細胞培養可用于:(1)血液流動性、防止血栓形成、調節血管張力等研究;(2)選擇性通透性以及免疫調節等方面研究。實驗方法原理貼塊法適用于內皮細胞產量低的、管徑較小血管的內皮細胞培養,其方法較酶消化法簡便、經濟。實驗材料雄性Wistar大鼠試劑、試劑盒DMEM胎牛血清內皮細胞生長因子肝素鈉青
平滑肌細胞培養方法
貼壁法原代培養1.1 細胞培養1.1.1 培養液配制 DMEM(美國Gibco公司),Hepes(15mmol/L),青霉素(100u/ml),鏈霉素(100mg/ml),優質胎牛血清(原代培養濃度20%,傳代培養濃度10%,美國Hyclone)。1.1.2 培養器皿 25cm2塑料培養瓶(Cost
上皮細胞類培養實驗_內皮細胞培養實驗
實驗方法原理內皮細胞易于從血管分離進行培養成單層細胞,對研究內皮細胞再生生、腫瘤促血管生長因子(TAF)等有很大應用價值。人內皮細胞培養可應用人臍帶臍靜脈、動物大動脈等,用灌流消化法獲取細胞最為簡便。實驗材料臍帶試劑、試劑盒膠原酶消化液PBS儀器、耗材注射器離心管培養基實驗步驟1. ?取產后的新鮮臍
平滑肌細胞培養方法2
1 材料與方法1.1 材料 9~12d新生健康清潔級KM小鼠,雌雄不限,購自重慶醫科大學實驗動物中心。RPMI-1640干粉培養基,D-Hanks粉,標準胎牛血清,胰蛋白酶粉(1∶250)均購自Hy-Clone公司;青霉素鈉、硫酸鏈霉素購自華北制藥廠;鼠抗兔平滑肌α肌動蛋白單克隆抗體,購自Zymed
細胞技術專題:兔膀胱平滑肌細胞培養實驗(一)
兔膀胱平滑肌細胞培養可以:(1)分離得到高純度兔膀胱平滑肌細胞;(2)進行細胞學鑒定研究;(3)用于細胞學其他研究。實驗方法酶分離法 實驗方法原理運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后,完整分離膀胱平滑肌層。然后以酶分離法獲取兔膀胱平滑肌細胞,體外原代和傳代培養分離細胞。在倒置顯微鏡下
細胞技術專題:兔膀胱平滑肌細胞培養實驗(三)
?收起? 注意事項1. 應嚴格無菌操作。2. 仔細徹底剝除膀胱黏膜、黏膜下及漿膜層,是確保獲的大量高質單個膀胱平滑肌細胞的基礎。3. 膀胱平滑肌組織應盡量減碎以確保充分消化。4. 嚴格控制膠原酶和胰蛋白酶的濃度和消化時間,見消化液混濁、組織塊呈絮狀,或在倒置顯微鏡下見消化液中有較多單個細胞或細胞小
細胞技術專題:兔膀胱平滑肌細胞培養實驗(二)
二、結果 兩只兔所有標本均獲成功。倒置顯微鏡觀察平滑肌細胞24 小時均可見膀胱平滑肌細胞貼壁生長,正常兔 7 天左右、而梗阻兔則需10~12 天可于50 毫升培養瓶約 80%匯合。均傳代順利,傳代后約正常兔6天左右、而梗阻兔需8~9 天可于50 毫升培養瓶約 80%匯合。本組中均傳至第8 代,經第8
人滑膜細胞培養實驗
實驗方法原理滑膜細胞是襯于關節內表面的細胞性內膜和內膜下層,分為A型滑膜細胞(滑膜巨噬細胞)和B型滑膜細胞(滑膜成纖維細胞).其中A型細胞最顯著的功能是吞噬作用和胞飲作用,該型細胞具有吞噬壞死細胞碎屑及病理狀態下關節腔內其他物質的功能;B型細胞的功能是合成輸出蛋白且與透明質酸酶的形成密切相關,同時與
人滑膜細胞培養實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 滑膜細胞是襯于關節內表面的細胞性內膜和內膜下層,分為A型滑膜細胞(滑膜巨噬細胞)和B型滑膜細胞(滑膜成纖維細胞).其中A型細胞最顯著的功能是吞噬作用和胞飲作用,該型細胞具有吞噬壞死細胞碎屑及病理狀態下關節腔內其他物質的功能;B型
人滑膜細胞培養實驗
? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 滑膜細胞是襯于關節內表面的細胞性內膜和內膜下層,分為A型滑膜細胞(滑膜巨噬細胞)和B型滑膜細胞(滑膜成纖維細胞).其中A型細胞最顯著的功能是吞噬作用和胞飲作用,該型細胞具有吞噬壞死細胞碎屑及病理狀態下關節腔內其他物質的功能;B型
兔膀胱平滑肌細胞培養
實驗方法原理 運用顯微手術器械在肉眼下仔細剔除膀胱黏膜層及漿膜層后,完整分離膀胱平滑肌層。然后以酶分離法獲取兔膀胱平滑肌細胞,體外原代和傳代培養分離細胞。在倒置顯微鏡下觀察細胞形態及生長狀況,同時進行細胞爬片H-E染色和透射電鏡等形態學觀察分析,并應用免疫熒光染色平滑肌特有的α-肌動蛋白進行細胞學鑒
平滑肌細胞培養方法4
?動脈平滑肌細胞培養的幾個問題組織塊大小邊緣密度翻面時間觀察時間對原代細胞萌發的影響對于貼塊法的原代培養來源,由于細胞并非直接獲得,而是從組織塊邊緣長出,其中有一“突破過程”,且細胞萌發后尚需一定的細胞密度才能使其存活、增殖,故組織塊大小、邊緣、密度均影響細胞萌出與否及細胞存活、增殖。公認的方法是將
臍靜脈內皮細胞培養方法2
(2)術前準備取一根臍帶(離體3個小時內,平均1小時,剪去夾傷部位)2個50ML注射器,1個30ML注射器和1個10ML注射器1個止血鉗,2根插管,14號線2CM長,消毒巾,消毒手術刀和無菌手套手術區域準備:一塊床單和無菌手套封套3 臍帶手術操作和培養(1)用手術刀整齊切斷臍帶兩端(2)靜脈(口徑最
臍靜脈內皮細胞培養方法1
一、試劑和緩沖液配制1、胎牛血清(氯化十六烷基吡啶)(1)解凍胎牛血清(2)在56℃加熱30分鐘(脫補體作用,蓋上瓶)(3)取25ml上述液體放在無菌的50ml的falcon里分餾(4)在-20℃冰凍餾份2、磷酸鹽緩沖液(PBS)(1)無鈣鎂離子的100ML的PBS(10×)(生命技術)(2)900
大鼠主動脈內皮細胞培養實驗
貼塊法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 貼塊法適用于內皮細胞產量低的、管徑較小血管的內皮細胞培養,其方法較酶消化法簡便、經濟。
大鼠主動脈內皮細胞培養實驗
貼塊法 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 貼塊法適用于內皮細胞產量低的、管徑較小血管的內皮細胞培養,其方法較酶消化法簡便、經濟。
大鼠主動脈內皮細胞培養實驗
大鼠血管內皮細胞培養可以:(1)用于血液流動性、防止血栓形成、調節血管張力等研究;(2)用于選擇性通透性以及免疫調節等方面研究。實驗方法貼塊法實驗方法原理貼塊法適用于內皮細胞產量低的、管徑較小血管的內皮細胞培養,其方法較酶消化法簡便、經濟。但缺點使易混有成纖維細胞和平滑肌細胞,前者的貼壁時間和內皮接
胎兒臍動脈栓塞期待治療病例分析
?臍動脈栓塞( umbilical artery thrombosis,UAT) 是一種罕 見的產科并發癥,可導致胎死宮內等嚴重不良妊娠結局的發 生。目前尚無明確的 UAT 臨床診療方案。本文現將山東大 學齊魯醫院( 青島) 產科收治的 2 例 UAT 期待治療病例報道 如下,以供臨床醫師參考。?1
腫瘤細胞培養方法簡介(機械刮除法、反復帖壁法、消化...
一、機械刮除法1、標記:鏡下觀察,用不脫色筆在培養瓶皿的背面圈下生長腫瘤細胞的部位。2、刮除:棄掉培養液,把無菌膠刮伸入瓶皿中,肉眼或顯微鏡窺視下,刮除無標記空間。3、用Hanks液沖洗一兩次,洗除被刮掉的細胞。4、注入培養液繼續培養,如發現仍有成纖維細胞殘留,可重復刮除至完全除掉為止。二、反復帖壁
特殊細胞培養實驗_微載體細胞培養法
實驗方法原理微載體細胞培養開始于60年代末期,最早使用離子交換凝膠作為載體,輕微攪動即可懸液在培養基中,因而可增加細胞附著的面積,達到大量培養細胞的目的。后來,根據細胞附著生長的特點,對微載體進行了改良,使其帶有電荷或其它介質,更利于細胞附著和生長。這一方法亦可用于常規量的培養,也可用于大規模的培養
干消化法與濕消化法的優缺點
1.濕消化法:指在適量的食品樣品中,加入氧化性的強酸,然后在一定溫度條件下反應,破壞食品中的有機物,使待測的無機成分釋放出來,形成不揮發的無機化合物的方法。 優點:有機物分解速度快,加熱溫度較干灰化法低,可減少待測成分的揮發損失。 缺點:試劑用量大,有時空白值比較高,消化過程中會產生大量有害
組織的分離實驗_胰蛋白酶消化消化分離法
實驗方法原理胰蛋白酶適于消化細胞間質較小的軟組織,如胚胎組織、羊膜、上皮組織、肝、腎等軟組織,對傳代細胞也非常好。用于消化纖維性組織或較硬的癌組織則較差。Ca2+和Mg2+對胰蛋白酶的活性有一定抑制作用,故需用不含這些離子的BSS 配制。血清有抑制胰蛋白酶活性的作用,因此在做細胞傳代時,用胰蛋白酶消