蛋白質糖基化檢測實驗_生物素親和素復合物觀察糖蛋白
用生物素-親和素復合物觀察選擇性標記糖蛋白實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒醋酸鈉丙酮實驗步驟一、過碘酸鈉氧化糖蛋白樣品1. 在 0.1 mol/L 醋酸鈉 pH 4.5 緩沖液（50 mmol/L 磷酸鈉，pH 7.4 ) 中制備蛋白溶液，在冰上預冷。2. 用水制備新鮮的 0.5 mol/L 過碘酸鈉原液，暗處保存，并在冰上預冷。3. 加足夠新鮮的過碘酸原液至蛋白樣品中使成至 10 mmol/L ( 1 mmol/L )。4. 在室溫下避光保存 1 小時，或在 4℃ 保存 4~24 小時（冰上 30 分鐘）。5. 加入 1/10 體積的 0.5 mol/L 1，2-亞乙基二醇終止反應。6. 用 TCA/DOC 沉淀蛋白，按照 PNGaseF 方案第4步所述進行。7. 冷丙酮清洗沉淀物兩次。或者通過對 PBS 透析去除 1，2-亞乙基二醇。至此，樣品可以進行生物素化。二、用生物胞素酰肼生物素化醛基1. 在 DMSO ( 或 DMF) ......閱讀全文
蛋白質糖基化檢測實驗_生物素親和素復合物觀察糖蛋白
用生物素-親和素復合物觀察選擇性標記糖蛋白實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒醋酸鈉丙酮實驗步驟一、過碘酸鈉氧化糖蛋白樣品1. 在 0.1 mol/L 醋酸鈉 pH 4.5 緩沖液（50 mmol/L 磷酸鈉，pH 7.4 ) 中制備蛋白溶液，在冰上預冷。2. 用水制備新鮮的 0.5 mol/L 過碘酸鈉原
蛋白質糖基化的檢測實驗——植物凝集素親和層析
試劑、試劑盒TBS儀器、耗材植物凝集素柱實驗步驟1. 在含有 Ca2+、Mg2+?的 TBS 中平衡植物凝集素親和介質，用至少 20 個柱體積清洗。2. 在 5 ml —次性塑料吸管或注射器中制備 1 ml 植物凝集素柱。3. 以緩慢流速（小于 0.25 ml/min）將蛋白樣本上柱，回收所有過柱子
親和層析－－生物素/親和素純化
低耐壓：生物素瓊脂糖微球生物素瓊脂糖凝膠是用于純化或去除親和素或鏈霉親和素樣本的產品，生物素是通過間隔臂以多種共價結合的方式固定在基材上的，最大限度避免配基脫落。?這種結合非常緊密，可以應用于不可逆結合（如：從某個樣本中去除親和素組分）高耐壓：鏈霉親和素 HC 瓊脂糖微球?ABT Streptavi
植物蛋白質組學和糖基化實驗（一）
實驗材料?鏈霉親和素-過氧化物酶牛胰核糖核酸酶 B甲基比喃甘露糖苷卵清白蛋白試劑、試劑盒?DIG 糖鏈檢測試劑TTBS 緩沖液Lectin- biotinTBS 緩沖液實驗步驟 3.1 這個蛋白質是糖蛋白嗎只有一種方法能全面的回答“這個蛋白質是糖蛋白嗎?”這個問題。這需要使用能檢測并定量印記上糖蛋白
標記親和素生物素法（BAELISA）實驗——檢測未知抗原
實驗方法原理親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，對生物素有非常高的親和力（結合常數高達1015M-1）。生物素很易與蛋白質（如抗體等）以共價鍵結合。這樣，結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應，既起到了多級放大作用，又由于酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原（
免疫印跡與免疫檢測實驗——親和素生物素偶聯
實驗材料蛋白質試劑、試劑盒TTBS緩沖液TBS緩沖液過氧化物酶堿性磷酸酶儀器、耗材搖床硝酸纖維素膜尼龍膜實驗步驟1. ?在旋轉搖床或擺動平臺中持續搖動使膜與合適的封閉液平衡。對于硝酸纖維素膜或PVDF膜，需在室溫封閉30~60 min。尼龍膜則需在37℃封閉2 h。2. ?用TTBS溶液（用于硝酸纖
標記親和素生物素法（BAELISA）實驗——檢測未知抗體
實驗方法原理包被抗原：用0.05 mol/L pH9.6碳酸鹽緩沖液將已知的抗原作適當稀釋，于聚苯乙烯酶標板的孔中加0.1 ml，于4 ℃放置18～24 h。用洗滌緩沖液洗3次，每次3 min。?加樣：加適當稀釋的待檢樣品（未知抗體）于反應孔中，同時作空白、陰性和陽性對照孔。37 ℃孵育1 h，洗滌
生物素親和素標記缺點
靈敏度生物素容易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合，形成的生物素衍生物，不僅保持了大分子物質的原有生物活性，而且比恬度高，具多價性。此外，每個親和素分子有四個生物素結合部位，可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此，BAS具有多級放大作用，使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。特異
生物素親和素系統介紹
生物素－親和素系統（Biotin-Avidin—System，BAS）是70年代末發展起來的一種新型生物反應放大系統。生物素與親和素之間高親合力的牢固結合以及多級放大效應，使BAS免疫標記和有關示蹤分析更加靈敏。BAS目前已廣泛用于抗原、抗體的定性、定量檢測及定位觀察研究。生物素（biotin，B）
標記親和素生物素法（BAELISA）實驗
實驗方法原理 親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，對生物素有非常高的親和力（結合常數高達1015M-1）。生物素很易與蛋白質（如抗體等）以共價鍵結合。這樣，結合了酶的親和素分子與結合有特異性抗體的生物素分子產生反應，既起到了多級放大作用，又由于酶在遇到相應底物時的催化作用而呈色，達到檢測未知抗原
標記親和素生物素法（BAELISA）實驗
檢測未知抗原 檢測未知抗體 ? ? ? ? ? ? 實驗方法原理 親和素是卵白蛋白中提取的一種堿性糖蛋白，對生物素有非常高的親和力（結合常數高達1015M-1）。
親和素和生物素為什么親和力最高
生物素容易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合，形成的生物素衍生物，不僅保持了大分子物質的原有生物活性，而且比恬度高，具多價性。此外，每個親和素分子有四個生物素結合部位，可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此，BAS具有多級放大作用，使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。特異性親和
生物素親合素系統的生物素與親和層析介紹
親和層析是將具有特殊結構的親和分子制成固相吸附劑放置在層析柱中，當要被分離的蛋白混合液通過層析柱時，與吸附劑具有親和能力的蛋白質就會被吸附而滯留在層析柱中。那些沒有親和力的蛋白質由于不被吸附，直接流出，從而與被分離的蛋白質分開，然后選用適當的洗脫液， 改變結合條件將被結合的蛋白質洗脫下來。 生
鏈親和素生物素結合物免疫熒光標記實驗
免疫熒光標記是微生物學、免疫學、病理學及免疫組織化學中常用的一種免疫學實驗方法，在臨床上得到了廣泛的應用。實驗方法原理免疫熒光標記技術（immunofluorescence technique）是將已知的抗體或抗原分子標記上熒光素，當與其相對應的抗原或抗體起反應時，在形成的復合物上就帶有一定量的熒光
鏈親和素生物素結合物免疫熒光標記實驗
實驗材料 組織樣品試劑、試劑盒 生物素熒光染料鏈親和素儀器、耗材 離心機搖床實驗步驟 1. ?將濕紙巾鋪于載玻片盒底部做成加濕盒，由冰凍切片儀中取出載有切片的載玻片，放入玻片盒中（每邊放6片），或故濕盒中（載玻片勿相互接觸）。?2. ?待載玻片達室濕且未干時，鋪加PBS于切片上（勿溢出玻片）。?3.
生物素親和素系統要注意什么問題
靈敏度生物素容易與蛋白質和核酸類等生物大分子結合，形成的生物素衍生物，不僅保持了大分子物質的原有生物活性，而且比恬度高，具多價性。此外，每個親和素分子有四個生物素結合部位，可同時以多價形式結合生物素化的大分子衍生物和標記物。因此，BAS具有多級放大作用，使其在應用時可極大地提高檢測方法的靈敏度。特異
親和素－生物素系統在ELISA中的應用
親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小分子
植物蛋白質組學和糖基化實驗1
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶牛胰核糖核酸酶 B甲基比喃甘露糖苷卵清白蛋白試劑、試劑盒DIG 糖鏈檢測試劑TTBS 緩沖液Lectin- biotinTBS 緩沖液實驗步驟3.1 這個蛋白質是糖蛋白嗎只有一種方法能全面的回答“這個蛋白質是糖蛋白嗎?”這個問題。這需要使用能檢測并定量印記上糖蛋白的總糖
植物蛋白質組學和糖基化實驗
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 牛胰核糖核酸酶 B ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
生物素酰化探針的檢測實驗
比色法 化學發光法 ? ? ? ? ? ? 實驗材料 DNA 試劑、試劑盒
生物素酰化探針的檢測實驗
實驗材料?DNA試劑、試劑盒?磷酸酶緩沖液封阻液牛血清蛋白TENBT儀器、耗材?離心機分光光度計搖床實驗步驟 1.? 用DNA稀釋緩沖液，稀釋生物素酰化標準DNA，濃度為0、1、2、5、10和20 pg/μl。以同樣稀釋液處理待測DNA。2.? 對干硝酸纖維素濾膜：每個稀釋度取1 μl 點膜，在80
SABC法親和素與生物素系統的操作流程
實驗概要本實驗介紹了SABC法親和素與生物素系統的操作步驟。實驗原理SABC法或稱S-P法、LSAB法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有HRP或AKP酶的鏈霉親和素(streptavidin)連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量60000，不含
SABC法親和素與生物素系統的操作流程
實驗概要本實驗介紹了SABC法親和素與生物素系統的操作步驟。實驗原理SABC法或稱S-P法、LSAB法，它是采用生物素標記的第二抗體與結合有HRP或AKP酶的鏈霉親和素(streptavidin)連接來測定細胞及組織中的抗原。鏈霉親和素是一種從鏈霉菌培養物中提取的蛋白質，相對分子質量60000，不含
簡述親和素－生物素系統在ELISA中的應用
親和素是一種糖蛋白，可由蛋清中提取。分子量60kD，每個分子由4個亞基組成，可以和4個生物素分子親密結合。維生素H，分子量244.31，存在于蛋黃中。用化學方法制成的衍生物，生物素－羥基琥珀亞胺酯（biotin-hydroxysuccinimide，BNHS）可與蛋白質、糖類和酶等多種類型的大小
生物素親和素法化學染色有哪些技術呢
生物素即維生素H，是一種堿性蛋白。親和素具有4個與生物素親和力極高的結合位點。能夠彼此牢固結合而不影響彼此的生物學活性。常用的技術類型有： （一）親和素-生物素-過氧化物酶復合物技術（ABC） 原理：親和素與酶標生物素結合，形成可溶性親和素-生物素-過氧化物酶復合物（ABC）。其與生物素化抗
生物素親和素系統的基本類型及原理
基本類型有兩種，一類以游離親和素為中間物，分別連接包含生物素大分子的待檢反應體系和標記生物素，稱為BAB法；后來又在此基礎上發展了親和素-生物素化酶復合物技術（ABC）。另一類是直接用標記親和素連接生物素化大分子反應體系進行檢測的BA法，或稱標記親和素-生物素法（LAB）。此外，依據待檢反應體系中所
蛋白質糖基化的檢測實驗——酶脫糖基化
實驗方法原理用酶或化學脫糖基化、通過選擇性標記或通過凝集素親和層析法是檢測蛋白糖基化常用方法。實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒磷酸鈉緩沖液蛋白溶液β-巰基乙醇NP-40 溶液儀器、耗材SDS-PAGE玻璃器皿植物凝集素柱實驗步驟一、用 PNGaseF（N-多糖酶）處理1. 以 0.1 mol/L 磷酸鈉
蛋白質糖基化的檢測實驗——化學脫糖基化
實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒TFMS苯甲醚儀器、耗材玻璃器皿實驗步驟1. 在冰上預冷干凈、干燥的玻璃器皿。用帶有 Teflon-絲帽的玻璃試管混合試劑。2. 打開或混合試劑前，在冰上預冷所有的溶液。從冰冷的原液中，TFMS:苯甲醚 ( Sigma) 以 2:1 (v/v) 的比例混合。緩慢的向試管內
抗生物素蛋白生物素過氧化物酶復合物技術
中文名稱抗生物素蛋白-生物素-過氧化物酶復合物技術英文名稱avidin-biotin-peroxidase complex technique;ABC technique定 義一種放大的酶免疫技術。即將特異性抗體與生物素偶聯并結合待測抗原，然后加入結合有過氧化物酶分子的親和素，由此檢出相應抗原。應
生物素親和素酶聯免疫吸附試驗(BASELISA)
生物素親和素(又稱抗生物素)系統(biotinavidin system,BAS)標記抗體的技術是20世紀70年代后期發展起來的一種新的免疫檢測方法。由于親和素與生物素間的親和力極強，結合迅速，且極其穩定，生物素標記抗體和酶的標記率高，又不影響蛋白的活性，使BAS標記技術比常規酶聯免疫、放