蛋白質糖基化的檢測實驗——化學脫糖基化
實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒TFMS苯甲醚儀器、耗材玻璃器皿實驗步驟1. 在冰上預冷干凈、干燥的玻璃器皿。用帶有 Teflon-絲帽的玻璃試管混合試劑。2. 打開或混合試劑前，在冰上預冷所有的溶液。從冰冷的原液中，TFMS:苯甲醚 ( Sigma) 以 2:1 (v/v) 的比例混合。緩慢的向試管內（放在冰上）注入一股氮氣 10 秒鐘，蓋住試管倒轉幾次，然后用氮氣重復處理。保持溶液在冰上。3. 用凍干或真空離心法制備充分干燥的糖蛋白樣品。4. 當樣品已干燥，蓋上樣品試管并用封口膜封住蓋子周圍，在冰上充分冷卻。5. 在干燥、冰冷的蛋白樣品中，加 200 μl 冷的 TFMS:苯甲醚，并完全溶解。6. 在樣品試管冰浴的同時，用緩慢的一股氮氣快速排氣。迅速蓋上試管蓋，用封口膜再次密封。7. 樣品保存在冰上 2 小時，然后在 -20℃ 中再保存 2 小時。8. 放樣品于冰上，加 10 μl 冰冷的 2 mol/L Tris 堿，然后加 ......閱讀全文
蛋白質糖基化的檢測實驗——化學脫糖基化
實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒TFMS苯甲醚儀器、耗材玻璃器皿實驗步驟1. 在冰上預冷干凈、干燥的玻璃器皿。用帶有 Teflon-絲帽的玻璃試管混合試劑。2. 打開或混合試劑前，在冰上預冷所有的溶液。從冰冷的原液中，TFMS:苯甲醚 ( Sigma) 以 2:1 (v/v) 的比例混合。緩慢的向試管內
蛋白質糖基化的檢測實驗——酶脫糖基化
實驗方法原理用酶或化學脫糖基化、通過選擇性標記或通過凝集素親和層析法是檢測蛋白糖基化常用方法。實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒磷酸鈉緩沖液蛋白溶液β-巰基乙醇NP-40 溶液儀器、耗材SDS-PAGE玻璃器皿植物凝集素柱實驗步驟一、用 PNGaseF（N-多糖酶）處理1. 以 0.1 mol/L 磷酸鈉
蛋白質糖基化的檢測
試劑、試劑盒 磷酸鈉緩沖液蛋白溶液β-巰基乙醇NP-40 溶液儀器、耗材 SDS-PAGE實驗步驟 一、用 PNGaseF（N-多糖酶）處理1. 以 0.1 mol/L 磷酸鈉（或 Tris-HCl，而不用檸檬酸）緩沖液，pH 7.4 ( 7.0~8.0 ) 配制高達 2 mg/ml 的蛋白溶液，并
蛋白質糖基化位點檢測實驗步驟
用酶或化學脫糖基化、通過選擇性標記或通過凝集素親和層析法是檢測蛋白糖基化常用方法。 一、用 PNGaseF（N-多糖酶）處理。 1. 以 0.1 mol/L 磷酸鈉（或 Tris-HCl，而不用檸檬酸）緩沖液，pH 7.4 ( 7.0~8.0 ) 配制高達 2 mg/ml 的蛋白溶液，并含 5
蛋白質糖基化分類
根據糖苷鏈類型，蛋白質糖基化可以分為四類，即以絲氨酸、蘇氨酸、羥賴氨酸和羥脯氨酸的羥基為連接點，形成-O-糖苷鍵型。以天冬酰胺的酰胺基、N一末端氨基酸的 α - 氨基以及賴氨酸或精氨酸的ω - 氨基為連接點，形成-N-糖苷鍵型;以天冬氨酸或谷氨酸的游離羧基為連接點，形成脂糖苷鍵型以及以半胱氨酸為連接
蛋白質糖基化的過程
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可以和
蛋白質糖基化的檢測實驗——植物凝集素親和層析
試劑、試劑盒TBS儀器、耗材植物凝集素柱實驗步驟1. 在含有 Ca2+、Mg2+?的 TBS 中平衡植物凝集素親和介質，用至少 20 個柱體積清洗。2. 在 5 ml —次性塑料吸管或注射器中制備 1 ml 植物凝集素柱。3. 以緩慢流速（小于 0.25 ml/min）將蛋白樣本上柱，回收所有過柱子
蛋白質糖基化的案例研究
蛋白質糖基化是一種生命活動中普遍存在的翻譯后修飾，賦予蛋白質不同的生物功能和增強的物理化學穩定性。糖基化的類型根據糖苷鍵中涉及的特定原子進行分類：O-糖基化將糖連接到絲氨酸、蘇氨酸和酪氨酸殘基的羥基氧上；N-糖基化將糖與天冬酰胺的酰胺氮連接；S-糖基化將糖添加到半胱氨酸的硫醇硫中，這類糖基化不太常見
糖基化位點檢測
經常聽到糖基化修飾，今天帶大家一探究竟。什么是糖基化修飾呢？糖基化是在糖基轉移酶的控制下，蛋白質或脂質附加上糖類的過程，發生于內質網和高爾基體。糖基化修飾是一類非常重要的翻譯后修飾，大部分膜蛋白和分泌蛋白均為糖蛋白，糖基化修飾不僅影響蛋白質的空間構象、活性、運輸和定位，同時在信號轉導、分子識別，
植物蛋白質組學和糖基化實驗
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 牛胰核糖核酸酶 B ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?
蛋白質的糖基化修飾主要分為
特征 N-連接 O-連接合成部位 粗面內質網 主要在高爾基體合成方式 來自同一個寡糖前體 一個個單糖加上去與之結合的氨基酸殘基 天冬酰氨 絲氨酸、蘇氨酸、羥脯、羥賴最終長度 至少5個糖殘基 1-4個糖殘基第一個糖殘基 N-乙酰葡萄糖胺 N-乙酰半乳糖胺大概清楚了吧！ 蛋白質糖基化是一種蛋白質修飾，作
糖基化蛋白質的基本信息
中文名稱糖基化蛋白質英文名稱glycosylated protein定 義帶有共價連接糖鏈的蛋白質。應用學科生物化學與分子生物學（一級學科），糖類（二級學科）
細胞化學詞匯ADP核糖基化
中文名稱：ADP核糖基化英文名稱：ADP-ribosylation定 義：煙酰胺腺嘌呤二核苷酸中的ADP核糖基部分與某些蛋白質的氨基酸殘基發生共價連接的反應。影響蛋白質的功能。應用學科：生物化學與分子生物學（一級學科），核酸與基因（二級學科）
植物蛋白質組學和糖基化實驗（四）
3.3 我的糖基化蛋白在哪實驗人員可通過這個方法獲得關于糖苷在蛋白骨架上的分布及糖苷本身的結構信息。這類實驗可在純化的糖蛋白或者從 1D 或 2D 電泳膠上分離出來的蛋白上進行，首先，用蛋白內切酶消化蛋白質，通過高效液相色譜（HPLC) 分離消化后的肽和糖肽混合物。對含有糖苷的收集組分進行糖
植物蛋白質組學和糖基化實驗1
實驗材料鏈霉親和素-過氧化物酶牛胰核糖核酸酶 B甲基比喃甘露糖苷卵清白蛋白試劑、試劑盒DIG 糖鏈檢測試劑TTBS 緩沖液Lectin- biotinTBS 緩沖液實驗步驟3.1 這個蛋白質是糖蛋白嗎只有一種方法能全面的回答“這個蛋白質是糖蛋白嗎?”這個問題。這需要使用能檢測并定量印記上糖蛋白的總糖
植物蛋白質組學和糖基化實驗（一）
實驗材料?鏈霉親和素-過氧化物酶牛胰核糖核酸酶 B甲基比喃甘露糖苷卵清白蛋白試劑、試劑盒?DIG 糖鏈檢測試劑TTBS 緩沖液Lectin- biotinTBS 緩沖液實驗步驟 3.1 這個蛋白質是糖蛋白嗎只有一種方法能全面的回答“這個蛋白質是糖蛋白嗎?”這個問題。這需要使用能檢測并定量印記上糖蛋白
植物蛋白質組學和糖基化實驗（五）
1. 含高甘露糖型 N-糖苷糖蛋白的鑒定本方法是我們實驗室以油菜籽為實驗材料建立的，本方法也適用于其他植物材料。( 1 ) 將 6 g 植物材料放入 4°C 預冷的研缽中，加入 50 ml 預冷的 TBS 緩沖液，研磨萃取蛋白質（見注釋 13)，接著 10000 g 離心萃取物 30 min，去
植物蛋白質組學和糖基化實驗（二）
刀豆球蛋白 A (ConA)- 過氧化物酶方法（根據參考文獻 20 修改的方法)。( 1 ) 通過 1D 或 2D 電泳分離，并轉移到硝酸纖維素膜上。( 2 ) 用 TTBS 緩沖液浸泡印跡膜 1 h。( 3 ) 將印跡膜在含有 ConA ( 25 μg/ml）的 TTBS 緩沖液中，室溫下溫育 2
植物蛋白質組學和糖基化實驗（三）
3. 糖基釋放后的蛋白質分析1 ) 糖基釋放的化學處理方法還原性氨化反可應選擇性的解離糖蛋白上的 O-糖苷（見注釋 10) 。去糖基化的蛋白用 1D SDS-PAGE 分析，將其遷移情況與其糖基化形式的蛋白進行比較，電泳遷移率的增加是 O-連糖苷出現在蛋白上的證據（見注釋 11)。( 1 ) 將 1
植物蛋白質組學和糖基化實驗2
3. 糖基釋放后的蛋白質分析1 ) 糖基釋放的化學處理方法還原性氨化反可應選擇性的解離糖蛋白上的 O-糖苷（見注釋 10) 。去糖基化的蛋白用 1D SDS-PAGE 分析，將其遷移情況與其糖基化形式的蛋白進行比較，電泳遷移率的增加是 O-連糖苷出現在蛋白上的證據（見注釋 11)。( 1 ) 將 1
高爾基體蛋白質糖基化的介紹
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可
蛋白質糖基化檢測實驗_生物素親和素復合物觀察糖蛋白
用生物素-親和素復合物觀察選擇性標記糖蛋白實驗材料蛋白樣品試劑、試劑盒醋酸鈉丙酮實驗步驟一、過碘酸鈉氧化糖蛋白樣品1. 在 0.1 mol/L 醋酸鈉 pH 4.5 緩沖液（50 mmol/L 磷酸鈉，pH 7.4 ) 中制備蛋白溶液，在冰上預冷。2. 用水制備新鮮的 0.5 mol/L 過碘酸鈉原
高爾基復合體的蛋白質糖基化
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可
陸豪杰：蛋白質糖基化的質譜解析
分析測試百科網訊 2020年9月14日，由中國質譜學會（中國物理學會質譜分會）主辦，分析測試百科網和中國質譜學會網承辦的2020年中國質譜學會質譜網絡研討會（2020 CMSS）正式開幕。本屆質譜網絡研討會正值中國質譜學會成立40周年，按報告內容涉及領域包括生命科學與組學、藥物藥理毒理分析、元素
胰島素受體糖基化的分析實驗
胰島素受體糖基化的分析實驗 ? ? ? ? ? ? 試劑、試劑盒 純化的胰島素受體 內切糖苷酶 F 內切糖苦酶 H
胰島素受體糖基化的分析實驗
本實驗介紹關于胰島素受體糖基化的分析。本實驗來源于蛋白質純化與鑒定實驗指南，作者：朱厚礎。試劑、試劑盒純化的胰島素受體內切糖苷酶 F內切糖苦酶 H神經氨酸酶甘油蛋白酶抑制劑儲液內切糖苷酶 F 緩沖液內切糖苷酶 H 緩沖液神經氨酸酶緩沖液SDS-PAGE 樣品緩沖液儀器、耗材凝膠電泳裝置X-射線膠片和
什么是糖基化？
糖基化是在酶的控制下，蛋白質或脂質附加上糖類的過程，發生于內質網。在糖基轉移酶作用下將糖轉移至蛋白質，和蛋白質上的氨基酸殘基形成糖苷鍵。蛋白質經過糖基化作用，形成糖蛋白。糖基化是對蛋白的重要的修飾作用，有調節蛋白質功能作用。
糖基化與免疫
蛋白糖基化是真核生物常見的蛋白質翻譯后修飾過程，合成后的或正在合成的蛋白質在糖基轉移酶的作用下，將活化的單糖加到肽鏈上。根據糖與肽鏈中氨基酸的連接方式不同，可將糖基化修飾分為三種形式：N-糖苷(N-glycan)、O-糖苷(O-gly-can)、糖基磷脂酰肌醇(glycosylphosphat
糖基化的過程介紹
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的 糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種 糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖鏈的空間結構決定了它可以
概述糖基化的過程
N-連接的糖鏈合成起始于內質網，完成于高爾基體。在內質網形成的糖蛋白具有相似的糖鏈，由Cis面進入高爾基體后，在各膜囊之間的轉運過程中，發生了一系列有序的加工和修飾，原來糖鏈中的大部分甘露糖被切除，但又被多種糖基轉移酶依次加上了不同類型的糖分子，形成了結構各異的寡糖鏈。糖蛋白的空間結構決定了它可