基因槍法轉化小麥實驗——使用PDS1000／He基因槍轟擊
實驗材料金粉試劑、試劑盒乙醇消毒液實驗步驟注意：由于基因槍通過高壓使粒子加速到極高的速度，故操作基因槍時應采取適當的安全措施并且佩戴安全眼鏡。在任何使用基因槍轉化的實驗中，必須設置對照檢測分化和選擇效率（見注 40) 。( 1 ) 根據 PDS-1000/He (見圖 4.2 ) 基因槍操作指南操作，將 DNA 包埋的金粉 ( 見第 3.2 節步驟 2 ) 轉到組織中。下面的參數是按照標準設置的（見注 41) 。距離 2.5 cm（破裂盤到載體膜之間距離），阻擋板孔徑 0.8 cm （載體膜到終止屏之間的距離），目標距離 5.5 cm（終止屏到被轟擊樣品平板距離），真空度 91.4~94.8 kPa，真空流速 5.0，排氣流量 4.5 [ 8]。( 2 ) 用 90% 乙醇對基因槍表面及樣品室進行消毒，使乙醇能夠完全蒸發。( 3 ) 用無水乙醇浸沒載體膜及其固定器、終止屏和破裂盤。放置在超凈臺使乙醇完全揮......閱讀全文
基因槍法轉化小麥實驗——使用－PDS1000/He－基因槍轟擊
實驗材料金粉試劑、試劑盒乙醇消毒液實驗步驟注意：由于基因槍通過高壓使粒子加速到極高的速度，故操作基因槍時應采取適當的安全措施并且佩戴安全眼鏡。在任何使用基因槍轉化的實驗中，必須設置對照檢測分化和選擇效率（見注 40) 。( 1 )? 根據 PDS-1000/He (見圖 4.2 ) 基因槍操作指南操
基因槍法轉化小麥實驗
實驗材料幼胚盾片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?漂白消毒劑 ? ?
基因槍法轉化小麥實驗（二）
實驗材料?BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒?無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材?離心管實驗步驟 1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。
基因槍法轉化小麥實驗（一）
實驗材料?幼胚盾片試劑、試劑盒?乙醇漂白消毒劑儀器、耗材?誘導培養基實驗步驟 下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小
基因槍法轉化小麥實驗——轟擊后未成熟盾片培養
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒新霉素磷酸轉移酶草胺膦乙酰轉移酶基因儀器、耗材基因槍誘導培養基分化培養基實驗步驟1. 誘導愈傷( 1 ) 基因槍轟擊后，將盾片分散轉移，每個重復分到 2~3 個含誘導培養基（MS9%? 0.5 Dag) 的平皿中，大約 10 個盾片一皿（見注 48)。( 2 ) 用封口膜
基因槍法轉化小麥實驗——準備供體材料
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒乙醇漂白消毒劑儀器、耗材誘導培養基實驗步驟下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小麥亞族 Tr
基因槍法轉化小麥實驗——DNA包裹金粉顆粒
實驗材料BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材離心管實驗步驟1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。重復用乙
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 乙醇 ? ? ? ?
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗試劑、試劑盒植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材EP 管移液槍實驗步驟1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適
基因槍法轉化大麥實驗（二）
4. 粒子轟擊幼胚(1) 幼胚滲透處理轟擊前，取分離 1 天后的幼胚，放在高滲培養基中處理 4 h。每皿 20~30 枚幼胚，置于培養皿中心 1.6 cm2 范圍內，盾片朝上。胚可以放得緊密一些，但相互之間不要碰到。轟擊之后幼胚繼續高滲處理 16 h。(2) 基因槍準備① 基因槍所有組件和內部的槍體
基因槍法轉化大麥實驗（一）
實驗材料?麥穗試劑、試劑盒?植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材?EP 管移液槍實驗步驟 1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，
基因槍法介紹
基因槍法，又稱粒子轟擊(particle bombardment)，高速粒子噴射技術(High-velocity particle microprojection)或基因槍轟擊技術(gene gun bombardment)，是由美國Cornell大學生物化學系John.C.Sanford等于198
基因槍法的作用
基因槍法，又叫粒子轟擊細胞法或微彈技術。基因槍的作用是用壓縮氣體(氦或氮等) 動力產生一種冷的氣體沖擊波進入轟擊室(因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷)，把粘有DNA?的細微金粉打向細胞，穿過細胞壁、細胞膜、細胞質等層層構造到達細胞核，完成基因轉移。只有很少部分的細胞符合這樣的要求，大多數會
什么是基因槍法？
基因槍法，又叫粒子轟擊細胞法或微彈技術。基因槍的作用是用壓縮氣體(氦或氮等) 動力產生一種冷的氣體沖擊波進入轟擊室(因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷)，把粘有DNA?的細微金粉打向細胞，穿過細胞壁、細胞膜、細胞質等層層構造到達細胞核，完成基因轉移。只有很少部分的細胞符合這樣的要求，大多數會
基因槍（顆粒轟擊法）相比傳統的轉化優勢？
簡單快速功能靈活，各類細胞類型通用只需要少量的DNA和細胞能進行多質粒共同導入能輸送大片段DNA沒有無光的基因或蛋白被轉導
轉基因技術基因槍法簡介
利用火藥爆炸或高壓氣體加速（這一加速設備被稱為基因槍），將包裹了帶目的基因的DNA溶液的高速微彈直接送入完整的植物組織和細胞中，然后通過細胞和組織培養技術，再生出植株，選出其中轉基因陽性植株即為轉基因植株。與農桿菌轉化相比，基因槍法轉化的一個主要優點是不受受體植物范圍的限制。而且其載體質粒的構建
細胞共定位
實驗概要本實驗子在構建了中間載體pA7-CFP和pA7-YFP的基礎上，構建了pA7- CFP- AtCOP1，pA7-AtCRY1-YFP，pA7- CFP-OsCOPl和pA7-OsCRY1b-YFP載體。利用基因槍將重組質粒轟擊入洋蔥內表皮。主要試劑高保真聚合酶(pfu ultra)，限制性內
細胞共定位
實驗試劑?高保真聚合酶(pfu ultra)，限制性內切酶(XhoI、SpeI、BamHI、SpeI、SacI)，金粉，無水乙醇，2.5MCaCl2?，20ul 0.1M亞精胺實驗設備?PCR擴增儀，PDS-1000/He型基因槍，激光共聚焦顯微鏡(Carl Zeiss LSM 510 )實驗材料?
基因槍法的基本原理
這一方法是依靠一種基因槍來幫助導入外源基因。基因槍根據動力系統可分為火藥引爆、高壓放電和壓縮氣體驅動三類。其基本原理是通過動力系統將帶有基因的金屬顆粒（金粒或鎢粒），將DNA吸附在表面，以一定的速度射進植物細胞，由于小顆粒穿透力強，故不需除去細胞壁和細胞膜而進入基因組，從而實現穩定轉化的目的。它具有
基因槍法的操作過程
基因槍法： 將直徑4um的鎢粉或金粉在供體DNA中浸泡，然后用基因槍將這些粒子打入細胞、組織或器官中，具有一次處理多個細胞的優點，但轉化效率較低。另外這種方法也用于基因治療和抗體制備，并已取得初步成效。
基因槍法的定義和原理簡介
基因槍法是一種基因導入儀技術，它把遺傳物質或其他物質附著于高速微彈直接射入細胞、組織和細胞器，是目前國際上最先進的基因導入技術。氣體基因槍以壓縮氣體（氦或氮）轉換成的氣體沖擊波為動力，使氣體基因槍槍產生一種“冷”的氣體沖擊波進入轟擊室，因此可免遭由“熱”氣體沖擊波引起的細胞損傷。氣體基因槍可在廣泛的
基因槍法可以得到永久轉基因植株嗎？
基因槍法注入基因后，該植物原則上一直都是轉基因植物，無性繁殖的后代也一直是轉基因植物，而其種子繁殖的下一代則不一定，有可能種子繁殖的下一代含有目標基因，也可能沒有。
基因槍技術的歷史
基因槍的歷史可以追溯到1987年。第一代基因槍是臺式基因槍，其中火藥型臺式基因槍是基因槍中最原始的類型。最早的基因槍是由美國康奈爾大學Sanford于1987年與該校工程技術專家Wolf及Kallen合作研究出的一種基因轉移的新方法。該方法一經發明便在學界嶄露頭角，Klein等人于1987年最早應用
基因槍的歷史
基因槍的歷史可以追溯到1987年。第一代基因槍是臺式基因槍，其中火藥型臺式基因槍是基因槍中最原始的類型。最早的基因槍是由美國康奈爾大學Sanford于1987年與該校工程技術專家Wolf及Kallen合作研究出的一種基因轉移的新方法。該方法一經發明便在學界嶄露頭角，Klein等人于1987年最早應用
基因槍操作步驟
微彈制備（金粉母液配制） （1）稱取60mg金粉加入Eppendorf管。 （2）加入1mL 75%乙醇，充分渦旋，靜置15min，1500rpm離心5min。 （3）棄上清，加入1mL無菌水，充分渦旋，1500rpm離心5min。重復3次。 （4）棄上清，加入1mL無菌
基因槍轟擊洋蔥表皮觀察GFP瞬時表達
實驗試劑高滲培養液(MS無機鹽、40g/L甘露醇)，高滲固體培養基(MS無機鹽、40g/L甘露醇、0.7% agar)，無水乙醇，無菌去離子水，12.5 M CaCl2 ，0.1 M亞精胺，等滲培養基(MS培養基)實驗設備高速離心機，1.5 ml Ep管，渦旋器，超凈臺，基因槍，氣瓶，激光共聚焦顯微
基因槍轟擊洋蔥表皮觀察GFP瞬時表達
實驗概要本實驗在構建了OsAGAP瞬時表達載體的基礎上，采用基因槍轟擊洋蔥表皮觀察了GFP的瞬時表達。主要試劑高滲培養液(MS無機鹽、40g/L甘露醇)，高滲固體培養基(MS無機鹽、40g/L甘露醇、0.7% agar)，無水乙醇，無菌去離子水，12.5 M CaCl2，0.1 M亞精胺，等滲培養基
棉花轉基因技術基因槍法花粉活體育種實例
中國農科院棉花研究所針對 20 多個棉花品種，成功建立了高效、穩定的規模化轉化體系，以流水線的操作方式，建立了高效、工廠化的棉花轉基因技術體系。本文援引中國農業科學院棉花研究所的發明ZL內容，以制備轉 GAPDH 基因棉花的具體方法為例，以應用實例演示棉花轉基因技術的具體應用案例。土壤鹽漬化是一個全
基因槍應用技術問答解疑
1.?基因槍轉化法對受體有啥要求？基因槍對動物：任何可暴露于基因槍口外的組織（皮膚、器官）細胞、外植體和器官培養；植物：田間和溫室使用、植物培養細胞和外植體；酵母、細菌、其它微生物細胞器、葉綠體、線粒體；受體廣泛。2.?基因槍（顆粒轟擊法）相比傳統的轉化那些優勢？簡單快速功能靈活，各類細胞類型通用只
影響基因槍轉化的因素？
首先是氣源的壓力大小，以及射擊距離，實驗證明轟擊次數太多也會造成對細胞的傷害，因此一般以2-3次為宜。