基因槍法轉化小麥實驗——DNA包裹金粉顆粒
實驗材料BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材離心管實驗步驟1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。重復用乙醇洗兩遍。( 2 ) 加入 1 ml 無菌水，超聲波處理 2 min，短暫離心 3s， 然后棄上清。重復一次。(3 ) 加入 1 ml 無菌水，渦旋振蕩重懸。每 50 μl 分裝到 1.5 ml 離心管，每次分裝前用渦旋振蕩混勻，確保金粉均勻分布。分裝好后 -20℃ 儲存。2. DNA 包裹金粉顆粒下面的操作步驟最好在冰上無菌環境中操作。( 1 ) 取出分裝的 50 μl 金粉懸浮液室溫融化（見第 3.2 節步驟 1 )，超聲波處理 1~2 min (見注 30 ) 。然后渦旋混勻確保完全重懸，特別是需要進一步......閱讀全文
基因槍法轉化小麥實驗——DNA包裹金粉顆粒
實驗材料BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材離心管實驗步驟1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。重復用乙
基因槍法轉化小麥實驗
實驗材料幼胚盾片 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒乙醇 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?漂白消毒劑 ? ?
基因槍法轉化小麥實驗（二）
實驗材料?BIO-RAD 亞微米金粉試劑、試劑盒?無水乙醇TE 緩沖液亞精胺儀器、耗材?離心管實驗步驟 1. 準備金粉顆粒( 1 ) 稱取 20 m BIO-RAD 亞微米金粉（0.6 μm) 至 1.5 ml 離心管中，加入 1 ml 無水乙醇。超聲波處理 2 min，短暫離心 3s，然后棄上清。
基因槍法轉化小麥實驗（一）
實驗材料?幼胚盾片試劑、試劑盒?乙醇漂白消毒劑儀器、耗材?誘導培養基實驗步驟 下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小
基因槍法轉化小麥實驗——準備供體材料
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒乙醇漂白消毒劑儀器、耗材誘導培養基實驗步驟下面介紹的是經過優化的針對幼胚盾片轉化的方法，幼穗可以代替幼胚盾片使用。對某些特定的品種，幼穗轉化比幼胚盾片轉化更有效，如普通小麥品種 T.aestivum vars. Baldus 和 Brigadier，以及其他小麥亞族 Tr
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗試劑、試劑盒植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材EP 管移液槍實驗步驟1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，調到合適
基因槍法轉化大麥實驗
實驗材料麥穗 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒植物凝膠 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?? 乙醇 ? ? ? ?
基因槍法轉化小麥實驗——使用－PDS1000/He－基因槍轟擊
實驗材料金粉試劑、試劑盒乙醇消毒液實驗步驟注意：由于基因槍通過高壓使粒子加速到極高的速度，故操作基因槍時應采取適當的安全措施并且佩戴安全眼鏡。在任何使用基因槍轉化的實驗中，必須設置對照檢測分化和選擇效率（見注 40) 。( 1 )? 根據 PDS-1000/He (見圖 4.2 ) 基因槍操作指南操
基因槍法轉化大麥實驗（一）
實驗材料?麥穗試劑、試劑盒?植物凝膠乙醇次氯酸鈉蒸餾水亞精胺儀器、耗材?EP 管移液槍實驗步驟 1. 組織培養基的準備( 1 ) 首先準備所需濃度 2 倍的植物凝膠，高壓滅菌（見注 2 ) 。( 2 )? 所有的組織培養基都要過濾滅菌，因此除了無菌的儲備液，其他培養基成分按所需濃度 2 倍的量混勻，
基因槍法轉化大麥實驗（二）
4. 粒子轟擊幼胚(1) 幼胚滲透處理轟擊前，取分離 1 天后的幼胚，放在高滲培養基中處理 4 h。每皿 20~30 枚幼胚，置于培養皿中心 1.6 cm2 范圍內，盾片朝上。胚可以放得緊密一些，但相互之間不要碰到。轟擊之后幼胚繼續高滲處理 16 h。(2) 基因槍準備① 基因槍所有組件和內部的槍體
基因槍法轉化小麥實驗——轟擊后未成熟盾片培養
實驗材料幼胚盾片試劑、試劑盒新霉素磷酸轉移酶草胺膦乙酰轉移酶基因儀器、耗材基因槍誘導培養基分化培養基實驗步驟1. 誘導愈傷( 1 ) 基因槍轟擊后，將盾片分散轉移，每個重復分到 2~3 個含誘導培養基（MS9%? 0.5 Dag) 的平皿中，大約 10 個盾片一皿（見注 48)。( 2 ) 用封口膜
基因槍應用技術問答解疑
1.?基因槍轉化法對受體有啥要求？基因槍對動物：任何可暴露于基因槍口外的組織（皮膚、器官）細胞、外植體和器官培養；植物：田間和溫室使用、植物培養細胞和外植體；酵母、細菌、其它微生物細胞器、葉綠體、線粒體；受體廣泛。2.?基因槍（顆粒轟擊法）相比傳統的轉化那些優勢？簡單快速功能靈活，各類細胞類型通用只
小麥花器官轉化實驗
實驗材料小麥種子試劑、試劑盒壯觀霉素利福平儀器、耗材溫室或走入式生長箱奧綠肥塑料盆LB 培養基MS 培養基解剖鏡巴龍霉素實驗步驟一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麥種子由美國農業部國家種質資源信息中心提供（http: // www .?? ars- grin .
小麥花器官轉化實驗
實驗材料 小麥種子試劑、試劑盒 壯觀霉素利福平儀器、耗材 溫室或走入式生長箱奧綠肥塑料盆LB 培養基MS 培養基解剖鏡巴龍霉素實驗步驟 一、材料1. 植物材料Crocus 或 Chinese Spring 小麥種子由美國農業部國家種質資源信息中心提供（http: // www . ? ars-
小麥花器官轉化實驗
實驗材料小麥種子 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?試劑、試劑盒壯觀霉素 ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ? ?利福平 ? ?
基因槍法的操作過程
基因槍法： 將直徑4um的鎢粉或金粉在供體DNA中浸泡，然后用基因槍將這些粒子打入細胞、組織或器官中，具有一次處理多個細胞的優點，但轉化效率較低。另外這種方法也用于基因治療和抗體制備，并已取得初步成效。
DNA的轉化實驗
體外通過基因工程手段所構建的含目的基因的重組質粒，選用轉化和篩選技術， 可獲得含重組的陽性克隆。在此陽性克隆中，DNA可在生物體系中大量擴增，繁殖， 保存以及表達目的基因的產物，這是ＰＣＲ體外擴增DNA所不能替代的。配合DNA重組技術，所獲得的，不同目的需要的陽性菌株已廣泛應用于科研，醫藥生產和生物
DNA測序——鳥槍法
實驗方法原理"鳥槍法"是一種由生物基因組提取目的基因的方法。首先利用物理方法(如剪切力、超聲波等)或酶化學方法(如限制性內切核酸酶)將生物細胞染色體DNA切割成為基因水平的許多片段，繼而將這些片段與適當的載體結合，將重組DNA轉入受體菌擴增，獲得無性繁殖的基因文庫，再結合篩選方法，從眾多的轉化子菌株
基因槍法介紹
基因槍法，又稱粒子轟擊(particle bombardment)，高速粒子噴射技術(High-velocity particle microprojection)或基因槍轟擊技術(gene gun bombardment)，是由美國Cornell大學生物化學系John.C.Sanford等于198
DNA轉化實驗指導5
2C.??Notes on Transformation?1.?????Bacto tryptone and yeast extract can cause allergic reactions.?2.?????All containers used to handle the bacteria (
DNA轉化實驗指導2
1B.??Cloning?1.?????A caveat on dephosphorylation: the most common reason for failure to obtain colonies is a result of adding too much BAP or CIP to
DNA轉化實驗指導4
2B.??Transformation?1.?????Preparation of electrocompetent DH5a?cells:??autoclave 4 baffled 1 liter flasks containing 500 mL LB.??Remove a 1 mL aliquo
DNA轉化實驗指導1
CONTENT?Transformation-Competent?E. coli?preparation???Inoue "ultra-competent" methodRubidium chloride methodCosmid packaging protocol?DNA Ligation an
DNA轉化實驗指導3
6.?????Simultaneous digestion of the pUC vector with both enzymes in the presence of 3 units of Shrimp Alkaline Phosphatase (Amersham BioSciences)?in
耐藥質粒－DNA轉化實驗
耐藥質粒 DNA轉化實驗 本實驗學習將質粒DNA分子轉入大腸桿菌的方法及如何篩選帶有質粒DNA的細胞克隆，即轉化子。 【原理】 受體菌Ecoli RRI 在低溫條件下經Ca++ 處理，可改變細胞膜的通透性，利于受體菌對DNA的攝取，這種經Ca++ 處理的細菌稱感受態菌。pBR322 質粒
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受體細胞一般
質粒－DNA－的轉化實驗
實驗方法原理 轉化活性是檢測質粒生物活性的重要指標，在基因克隆技術中，轉化（transformation）是特指以質粒 DNA 或以它為載體構建的重組質粒 DNA（包括人工染色體）導入細胞的過程， 是一種常用的基本實驗技術。 該過程的關鍵是受體細胞的遺傳學特性及其所處的生理狀態，用于轉化的受
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細胞系的
基因槍介導pVax-Dsred-IRES-EGFP質粒轉染體外培養細胞系的實驗研究 張 亮1 閻瑾琦1馬繼堯2 王 浩1 劉 寧1 賈銳1 韓 剛2 董金凱2 田仁禮2 于繼云[1] 1.軍事醫學科學院 基礎醫學研究所，北京 100850； 2.解放軍總醫院 泌尿外科，北京 1008
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細...（一）
基因槍介導pVax-Dsred-IRES-EGFP質粒轉染體外培養細胞系的實驗研究張 亮1 閻瑾琦1馬繼堯2 王 浩1 劉 寧1 賈銳1 韓 剛2 董金凱2 田仁禮2 于繼云[1]1.軍事醫學科學院 基礎醫學研究所，北京 100850； 2.解放軍總醫院 泌尿外科，北京 100853?[摘要] 目的
基因槍介導pVaxDsredIRESEGFP質粒轉染體外培養細胞
[摘要] 目的：建立基因槍子彈制備以及轉染體外培養cos-7細胞系的方法，觀察基因槍介導真核表達質粒pVax-Dsred-IRES-EGFP在細胞內的表達情況。 方法：亞精氨、氯化鈣沉淀法制備子彈，利用原子力顯微鏡觀察子彈制備（DNA+金顆粒）情況；以基因槍的方法分別轉染對照組和實